饱和氢气生理盐水对大鼠肝移植术后急性肾损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2017-06-11 22:10

  本文关键词：饱和氢气生理盐水对大鼠肝移植术后急性肾损伤的保护作用及机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究饱和氢气生理盐水对大鼠原位肝移植术后急性肾损伤的保护作用,并进一步探讨自噬参与其肾脏保护效应的分子机制。方法:健康成年雄性SD大鼠56只,周龄8~10周,体重220~250 g,采取随机数字表法随机分为4组(n=8):假手术组、大鼠原位肝移植模型组(OLT组)、饱和氢气生理盐水处理组(HS组)及氯喹预处理组(CQ组),其中假手术组8只,其它三组均为8对。假手术组行单纯开关腹操作,并游离相应血管和肝周韧带;大鼠原位肝移植模型组建立大鼠原位肝移植模型,并于无肝期前5 min经下腔静脉缓慢注射生理盐水6 ml/kg;饱和氢气生理盐水处理组于无肝期前5 min经下腔静脉缓慢注射饱和氢气生理盐水6 ml/kg,其它操作同大鼠原位肝移植模型组;氯喹预处理组于模型建立前1 h经腹腔注射自噬特异性抑制剂氯喹60mg/kg,其它处理同饱和氢气生理盐水处理组。再灌注后6 h抽取静脉血样和肾组织检测血清学和组织学指标,通过检测血清尿素氮(BUN)及肌酐(Cr)水平评价肾功能情况,测定肾组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性评价肾脏氧化应激程度,通过伊红-美蓝(HE)染色于光学显微镜下观察肾组织形态学改变,并行肾小管损伤评分;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色法定量检测肾小管上皮细胞凋亡情况,计算凋亡指数;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测活化的caspase-3、细胞色素c(Cyt c)等凋亡相关m RNA的表达水平;通过蛋白免疫印迹法(western blot)检测磷酸化p53(p-53)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin-1、活化的caspase-3和细胞色素c(Cyt c)等自噬及凋亡相关蛋白的表达水平;并且通过透射电子显微镜观察自噬小体和自噬溶酶体的形成情况以及肾小管上皮细胞超微结构改变。结果:与假手术组比较,OLT组肾功能显著降低,肾小管上皮细胞出现空泡及管型,肾小管损伤评分增加,肾脏氧化应激水平升高,细胞凋亡明显增加,凋亡指数升高,活化的caspase-3和Cyt c的表达水平显著上调,p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表达水平差异无统计学意义;与OLT组比较,HS组大鼠肾功能明显改善,肾组织空泡样改变减少,肾小管损伤评分降低,肾脏氧化应激损伤减轻,细胞凋亡明显减少,凋亡指数降低,并且活化的caspase-3和Cyt c的表达水平显著降低,与此同时,p53磷酸化、LC3Ⅱ及Beclin-1的表达明显上调,透射电镜下可见自噬小体和自噬溶酶体的形成增加;与HS组比较,CQ组大鼠肾功能降低,肾组织病理学损伤严重,肾小管损伤评分和凋亡指数升高,肾脏氧化应激水平升高,细胞凋亡增加,活化的caspase-3和Cyt c的表达水平上调,LC3Ⅱ及Beclin-1的表达下调,p53磷酸化的表达水平差异无统计学意义,应用氯喹抑制自噬后部分抵消了饱和氢气生理盐水的肾脏保护效应。结论:饱和氢气生理盐水可通过调控p53磷酸化的表达,诱导细胞自噬的激活,并且自噬激活通过抑制肾小管上皮细胞凋亡、减轻肾脏氧化应激损伤等途径缓解大鼠原位肝移植术后急性肾损伤。
【关键词】：氢 肝移植 肾损伤 自噬 细胞凋亡
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11
• 研究目的、方法11-13
• 1 对象和方法13-25
• 1.1 对象13-14
• 1.1.1 实验动物13
• 1.1.2 主要试剂13
• 1.1.3 主要仪器设备13-14
• 1.1.4 饱和氢气生理盐水的制备14
• 1.2 实验动物分组和模型建立14-16
• 1.2.1 实验动物分组14
• 1.2.2 大鼠原位肝移植模型的建立14-15
• 1.2.3 大鼠原位肝移植术中平均动脉血压的监测15-16
• 1.3 标本采集16
• 1.3.1 血液标本的采集16
• 1.3.2 肾组织标本的采集16
• 1.4 项目检测与方法16-25
• 1.4.1 血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）的检测16
• 1.4.2 肾组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的检测16-19
• 1.4.3 肾组织病理学检测19
• 1.4.4 TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡情况19-20
• 1.4.5 凋亡相关mRNA的检测20-22
• 1.4.6 肾小管上皮细胞超微结构的检测22
• 1.4.7 自噬及凋亡相关蛋白的检测22-25
• 1.5 统计学分析25
• 2 结果25-32
• 2.1 大鼠肝移植术中平均动脉血压的改变25
• 2.2 各组大鼠肾功能和氧化应激水平比较25-26
• 2.3 各组大鼠肾组织病理学改变26-29
• 2.4 各组大鼠凋亡情况比较29-30
• 2.5 肾小管上皮细胞超微结构改变30-31
• 2.6 各组大鼠自噬相关蛋白的比较31-32
• 3 讨论32-39
• 3.1 动物模型的建立32-33
• 3.1.1 实验动物的选择32
• 3.1.2 大鼠原位肝移植模型的建立32-33
• 3.2 肝移植术后急性肾损伤的机制33-34
• 3.3 氢气与急性肾损伤34
• 3.4 自噬与急性肾损伤34-39
• 3.4.1 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制自噬35
• 3.4.2 急性肾损伤诱导自噬35-36
• 3.4.3 自噬调控的分子机制36-37
• 3.4.4 自噬参与肾损伤保护的机制37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-46
• 发表论文和参加科研情况说明46-47
• 综述 含氢液/氢气用于器官功能保护的研究进展47-55
• 综述参考文献51-55
• 致谢55-56
• 个人简介56

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