FN对酒精性大鼠成骨细胞凋亡的影响及其机制的实验研究

发布时间：2017-06-25 13:15

  本文关键词：FN对酒精性大鼠成骨细胞凋亡的影响及其机制的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 探讨纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)对酒精引起的成骨细胞凋亡的影响,并探讨其相关机制。方法 分离并培养SD大鼠乳鼠颅骨的成骨细胞,细胞纯化后,碱性磷酸酶染色法对成骨细胞进行鉴定,取生长旺盛的第3代成骨细胞随机分为正常组,酒精组和FN组:正常组不进行任何干预,酒精组加入100mmol/L酒精,FN组分别加100mmol/L酒精和不同浓度的纤维黏连蛋白(20μg/ml,40μg/ml,60μg/ml,80μg/ml)。分别于24h、48h通过MTT比色法检测各组间成骨细胞的增殖情况。细胞培养48h行流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。同法再次分离并培养成骨细胞,以上方法分组后24h行RT-PCR检测各组凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA的表达变化。结果 使用酶消化成功分离出细胞,差速粘附法纯化后,碱性磷酸酶染色可见阳性细胞胞浆被染成棕褐色,若干核仁不等,证实具有成骨细胞表型,成功分离培养出成骨细胞。流式细胞仪分析显示,与正常组(3.86±0.98%)相比,酒精组干预48h后细胞凋亡率增加(14.42±1.26%),差异有统计学意义(P0.05)。FN组随着纤维黏连蛋白浓度增加,凋亡率逐渐减少,分别为12.80±1.08%,8.51±1.02%,5.75±0.86%,5.52±0.82%。与酒精组比较,差异有统计学意义(P0.05),RT-PCR结果示成骨细胞经100mmol酒精干预后,与正常组比较,Bcl-2 mRNA表达强度降低,Bax mRNA表达强度增高,Bcl-2/Bax比值下降,差异均有统计学意义(P0.05)。FN组与酒精组比较,随着纤维黏连蛋白浓度的增高,Bcl-2 mRNA表达强度增高,Bax mRNA表达强度降低,Bcl-2/Bax比值增大,差异均有统计学意义(P0.05)。结论(1)一定浓度的(100mmol/L)酒精可以明显的促进大鼠成骨细胞的凋亡。(2)随着纤维黏连蛋白(FN)浓度的增加,经酒精处理的大鼠成骨细胞凋亡逐渐减少,纤维黏连蛋白(FN)能干预影响酒精促进成骨细胞凋亡的作用。(3)酒精引起成骨细胞凋亡及纤维黏连蛋白(FN)保护作用,与调节Bcl-2和Bax mRNA表达有关,纤维黏连蛋白(FN)对酒精性成骨细胞凋亡的保护作用,是通过调节凋亡相关基因Bcl-2和Bax的蛋白表达实现的,有可能成为探索治疗酒精性骨性损害疾病的途径之一。
【关键词】：成骨细胞 酒精 凋亡 FN
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R681
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-13
• 1 材料与方法13-28
• 2 结果28-34
• 3 结论34-35
• 4 讨论35-41
• 参考文献41-45
• 综述 酒精性骨质疏松症研究进展45-62
• 参考文献57-62
• 攻读学位期间发表文章情况62-63
• 致谢63-64
• 个人简历64

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