透明质酸水凝胶包封对携带BMP-2基因的腺病毒转染骨髓间充质干细胞增殖活性及其表达的影响

发布时间：2017-07-14 00:13

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【摘要】：目的:探讨携带骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)基因的腺病毒转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后应用透明质酸水凝胶(hyaluronic acid hydrogel,HAH)包封对BMSCs增殖能力及其表达目标蛋白BMP-2的影响。方法:体外分离、提取、鉴定BMSCs,并将提前构建好的Ad-BMP-2转染BMSCs并使用HAH进行包封,激光共聚焦显微镜下观察Ad-BMP-2转染的BMSCs在HAH包封下的三维形态。实验分为4组(各组培养条件无差异):A组(未转染BMP-2的BMSCs);B组(HAH+未转染BMP-2的BMSCs);C组(转染BMP-2的BMSCs);D组(HAH+转染BMP-2的BMSCs)。分别一周内不同时相点(1d、2d、3d……7d)使用CCK-8法检测各组OD值来评价细胞增殖活性;ELISA法检测各组BMP-2的量(pg/ml)来评价目标蛋白的表达状况。结果 :激光共聚焦显微镜三维重建可观察到BMSCs可在HAH中任意平面铺展,有充足的生长空间。BMSCs的增殖活性检测显示,随着培养时间延长,细胞增殖活性逐渐增强,A组、C组4d后的OD值较1d时明显增大(P0.05);B组和D组5d后的OD值较1d时明显增大(P0.05);至7d时,A组OD值为1.283±0.061,B组为1.844±0.075;C组为1.570±0.099;D组为1.976±0.142,包封HAH的B、D组OD值均优于没有包封HAH的A、C组(P0.05)。BMP-2的表达在A、B组较弱,不同时间点间无显著性差异(P0.05);C、D组的BMP-2表达各时间点均明显高于A、B组(P0.05);从4d时起,C、D两组的BMP-2表达显著增加(与1d时比较P0.05),且D组明显优于C组,差异有显著性(P0.05)。结论 :三维环境下(即包封HAH后),Ad-BMP-2转染的BMSCs不仅有较强的增殖活性;而且对BMP-2的表达具有一定的促进作用。
【作者单位】： 新乡医学院;济宁医学院附属医院脊柱外科;济宁医学院附属医院创伤骨科;
【关键词】： 透明质酸水凝胶 骨形态发生蛋白 骨髓间充质干细胞 髓核组织工程
【基金】：山东省高等学校科技计划项目(编号:J14LL04) 山东省自然科学基金青年基金(编号:ZR2014CQ042)
【分类号】：R681.5
【正文快照】： of Jining Medical University,Jining,Shandong,272000,China颈椎及腰椎椎间盘退变是脊柱退行性疾病发生的第一步,被认为是颈背痛及腰痛的常见原因之一,严重影响着患者的生活质量[1];如何有效地减缓甚至逆转椎间盘的退变是当前骨科医生的梦想和挑战。生长因子在椎间盘修复领

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本文编号：538916