不同来源的EPCs对NSCs增殖分化的影响

发布时间：2017-07-15 22:11

  本文关键词：不同来源的EPCs对NSCs增殖分化的影响

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【摘要】：第一部分不同胎龄SD胎鼠脊髓源性NSCs特性的比较目的探究不同胎龄SD胎鼠脊髓源性NSCs增殖分化能力的差异。方法将选取的不同孕龄的SD孕鼠随机分为3组:A组(孕12d)、B组(孕14d)、C组(孕16d)。采用酶消化法结合机械分离法提取脊髓源性NSCs,检测不同时间点各组NSCs神经球的直径和数量,通过CCK-8法绘制各组NSCs的生长曲线。Brd-U和Nestin免疫荧光染色鉴定各组NSCs的增殖特性和神经干细胞属性。10%FBS诱导分化后行β-tubulinⅢ、GFAP免疫荧光染色分别鉴定诱导分化后的神经元和星形胶质细胞,比较各组NSCs诱导分化的神经元、星形胶质细胞和原浆型星形胶质细胞的比例。结果各组NSCs Brdu、Nestin、β-tubulinⅢ、GFAP免疫荧光染色均为阳性。B组神经元细胞的分化比例在三组中最高(22.74±0.79)%;后两组NSCs神经球直径和数量以及神经元的分化比例第一组(P0.05)。第3代NSCs培养第5天B组细胞OD值(0.5107±0.0272)高于C组(P0.05)。结论采用机械分离法结合酶消化法获取的脊髓源性NSCs在体外培养环境中增殖活力强,性质稳定;E14天取材培养的NSCs在体外生物学性质稳定,细胞的增殖活力旺盛,诱导后分化为神经元的分化比例高于E12d和E16d。第二部分SD胎鼠脑源性NSCs和脊髓源性NSCs增殖分化能力的比较目的比较SD胎鼠脑源性NSCs和脊髓源性NSCs在体外培养环境中增殖分化能力的差异。方法采用酶消化法结合机械分离法提取孕14天SD胎鼠脑源性NSCs和脊髓源性NSCs,通过Nestin和Brd-U鉴定NSCs的神经干细胞属性和增殖特性,检测比较各组NSCs神经球的直径和数量,采用CCK-8法绘制细胞曲线,比较不同来源NSCs的生长活力。10%FBS诱导后对分化细胞行β-TubulinⅢ和GFAP免疫荧光染色分别鉴定神经元和星形胶质细胞。比较两组神经元、星形胶质细胞和原浆型星形胶质细胞的分化比例。结果两种来源的NSCs对Nestin和Brd-U免疫荧光染色均呈阳性反应;两组NSCs诱导后均可分化β-TubulinⅢ阳性的神经元和GFAP阳性的星形胶质细胞。脑源性NSCs诱导分化后神经元比例(27.56±0.79)%较脊髓源性NSCs(25.58±0.72)%相比差异有统计学意义(P0.05),但是后者诱导分化后原浆型星形胶质细胞的比例(53.09±2.88)%则明显高于脑源性NSCs(50.60±2.88)%(P0.05)。结论脑源性NSCs分化后神经元的比例高于脊髓源性NSCs,而原浆型星形胶质细胞的分化比例后者高于前者。第三部分骨髓源性EPCs和外周血源性EPCs对NSCs的生物学作用目的探究骨髓和外周血来源的EPCs对神经干细胞增殖分化能力的影响。方法采用密度梯度离心法结合差速贴壁分离法提取SD大鼠外周血源性EPCs和骨髓源性EPCs。通过酶消化法结合机械分离法获得孕14d SD胎鼠脊髓源性NSCs。之后将EPCs接种于Transwell小室上层,NSCs位于下层,分为3组:A组,外周血源性EPCs+NSCs;B组,骨髓源性EPCs+NSCs;C组,DMEM条件培养基+NSCs。通过摄取Dil-ac LDL、结合FITC-UEA-1实验及CD34和v WF免疫荧光鉴定EPCs。Nestin/β-tubulin-Ⅲ/GFAP免疫荧光染色鉴定NSCs。检测各组一周内不同时间点神经球的直径和数量,采用CCK-8法绘制各组NSCs的生长曲线;10%FBS诱导分化后行β-tubulin-Ⅲ免疫荧光染色检测各组神经元分化比例,GFAP免疫荧光染色检测星形胶质细胞和原浆型星形胶质细胞的分化比例。结果来自外周血和骨髓的两种不同来源的EPCs均能够吞噬Dil-ac LDL,也能结合FITC-UEA-1。CD34和v WF免疫荧光染色均为阳性。A组和B组NSCs在体外培养环境中增殖能力均高于C组(P0.05);诱导后B组神经元的分化比例(27.37±0.80)%和原浆型星形胶质细胞的分化比例(53.78±2.37)%高于A组和C组(P0.05)。结论骨髓源性EPCs较外周血源性EPCs更能促进脊髓源性NSCs向神经元和原浆型星形胶质细胞分化。
【关键词】：神经干细胞 神经元 星形胶质细胞 原浆型星形胶质细胞 神经干细胞 不同来源 分化 神经元 星形胶质细胞 脊髓损伤 内皮祖细胞 神经干细胞 共培养
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 中文摘要3-6
• Abstract6-11
• 前言11-16
• 第一部分 不同胎龄胎鼠脊髓源性NSCs特性的比较16-27
• 材料与方法16-20
• 结果20-23
• 结论23-24
• 讨论24-27
• 第二部分 脑源性和脊髓源性NSCs分化特性的比较27-37
• 材料与方法28-30
• 结果30-34
• 结论34
• 讨论34-37
• 第三部分 骨髓源性和外周血源性EPCs对NSCs增殖分化的影响37-48
• 材料与方法37-40
• 结果40-44
• 结论44
• 讨论44-48
• 参考文献48-61
• 课题资助情况61-62
• 在学期间的研究成果62-63
• 致谢63-64
• 附录1 综述64-71
• 参考文献69-71
• 附录2 中英文缩略词对照表71

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本文编号：546005