右美托咪定通过p38 MAPK信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤和抑制凋亡的研究

发布时间：2017-08-04 01:24

  本文关键词：右美托咪定通过p38 MAPK信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤和抑制凋亡的研究

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【摘要】：背景脑组织对缺血缺氧极为敏感,可产生不可逆的神经功能损伤。若缺血超过一定的时间,恢复血供常会引起进一步的脑组织损伤,即缺血再灌注损伤。在围术期,特别是在一些高风险手术的围术期,有并发脑血管意外的风险。预防脑血管不良事件发生,是人们一直致力于解决的临床问题。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族在细胞内参与构成信号传递网络,是一组重要的丝/苏氨酸蛋白激酶。有研究报道,MAPK家族中的p38 MAPK信号通路在缺血或缺血再灌注后被激活,参与细胞凋亡。右美托咪定(Dex)是一种高选择性α2肾上腺素受体激动剂。很多研究已证实了右美托咪定具有脑保护作用,其保护作用的部分机制也已经被揭示,但对其分子信号传导通路的研究还处于起始阶段。右美托咪定对脑缺血再灌注损伤的保护作用是否通过p38 MAPK信号通路,目前仍未得到证实。本研究通过大鼠大脑中动脉闭塞的方法建立局部脑缺血再灌注损伤模型,观察局灶性脑缺血再灌注损伤中右美托咪定的神经保护作用,右美托咪定处理后对p38 MAPK信号转导通路的影响,以及通过抑制α2受体和p38 MAPK信号通路的激活对其机制进行深入研究。探讨p38 MAPK在右美托咪定保护脑缺血再灌注中的作用与调控机理。目的建立大鼠中动脉脑缺血再灌注模型,并用右美托咪定、SB203580、育亨宾进行处理,观察大鼠神经功能损伤症状、脑水肿程度、脑梗死程度、大脑皮质神经细胞凋亡情况、p-p38的表达情况,验证右美托咪定对抗局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,探讨右美托咪定在对抗脑缺血再灌注损伤中p38 MAPK通路的作用机制。方法1实验分组:大鼠随机分为8组,每组18只:假手术组(Sham control),假手术+右美托咪定组(Sham+Dex),假手术+p38抑制剂组(Sham+SB),假手术+育亨宾+右美托咪定组(Sham+Yoh+Dex),脑缺血再灌注组(I/R),脑缺血再灌注+右美托咪定组(I/R+Dex),脑缺血再灌注+p38抑制剂组(I/R+SB),脑缺血再灌注+育亨宾+右美托咪定组(I/R+Yoh+Dex)。2脑缺血再灌注模型建立:从大鼠右颈外动脉置线栓送入大脑中动脉,90min后退出线栓,实现再灌注。假手术者线栓不进入大脑中动脉。3神经功能评分:0分为无明显神经功能损伤症状;1分为提尾时病左前肢屈曲,不能完全伸直;2分为行走时向左侧转圈,静息时可维持平衡;3分为行走时向左侧倾倒,站立不稳;4分为不能自发行走,意识丧失。4动物模型的评价:剔除以下大鼠:线栓置入深度不足17 mm,手术时出血较多,颅底动脉内形成凝血块,出现SAH,无神经损伤症状,意识丧失或未到观察时间点死亡。5给药方式:右美托咪定于缺血同时静脉泵注3μg/kg于5 min内泵完,剩余药量6μg·kg-1·h-1持续泵注2 h。对照组泵注等量生理盐水。p38抑制剂SB2035800.1 nmol/μl,缺血前30 min,5μl,侧脑室注射。α2受体抑制剂育亨宾于缺血前30 min,0.5 mg/kg,腹腔注射。6脑水肿程度和脑梗死体积的测定:取脑,TTC染色后计算缺血侧体积增加的百分比和脑梗死体积百分比。7免疫荧光检测缺血脑组织Cleaved Caspase-3和p-p38表达情况,免疫荧光双标检测p-p38与Neu N、GFAP、Ox-42共表达情况。8蛋白免疫印记实验检测p-p38与p38的表达情况。结果1缺血再灌注模型评价:MCAO模型大鼠成功率约为66.1%。2神经功能评分、脑水肿和脑梗死程度、缺血区脑组织Cleaved Caspase-3表达情况:Sham control组、Sham+Dex组、Sham+SB组和Sham+Yoh+Dex组无差别。I/R组高于Sham组。I/R+Dex组明显低于I/R组。I/R+SB组低于I/R组,高于I/R+Dex组。I/R+Yoh+Dex组低于I/R组,高于I/R+Dex组。(P0.05)3缺血区脑组织p-p38阳性细胞数、缺血去脑组织p-p38/p38比值:Sham control组、Sham+Dex组、Sham+SB组和Sham+Yoh+Dex组无差异。I/R组高于Sham组。I/R+Dex组明显低于I/R组。I/R+SB组低于I/R组,但高于I/R+Dex组。I/R+Yoh+Dex组低于I/R组,但高于I/R+Dex组。(P0.05)4 p-p38/Neu N和p-p38/GFAP双标分布一致区很少;p-p38/OX-42双标存在较多的分布一致区。结论1右美托咪定具有减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤、抑制凋亡的神经保护作用。2 p38MAPK通路参与了右美托咪定对抗脑缺血再灌注损伤的神经保护。3在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型中,右美托咪定对p38MAPK通路的影响部分依赖α2肾上腺素受体。
【关键词】：脑缺血再灌注 右美托咪定 p38 MAPK
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-14
• 英文缩略词索引14-15
• 1. 前言15-17
• 2. 材料与方法17-31
• 2.1 实验材料17-22
• 2.1.1 实验动物17
• 2.1.2 主要试剂与药品17-18
• 2.1.3 主要仪器与设备18-19
• 2.1.4 溶液及试剂配制19-22
• 2.2 主要实验方法22-25
• 2.2.1 实验分组22-23
• 2.2.2 脑缺血再灌注模型制备23-24
• 2.2.3 神经功能评分24
• 2.2.4 动物模型的评价24-25
• 2.3 给药方式25-26
• 2.3.1 右美托咪定25
• 2.3.2 p38抑制剂SB20358025
• 2.3.3 α_2 受体抑制剂育亨宾25-26
• 2.4 脑水肿程度和脑梗死体积的测定26-27
• 2.5 免疫荧光27-28
• 2.5.1 灌注取脑27
• 2.5.2 冰冻切片27
• 2.5.3 免疫荧光染色27-28
• 2.5.4 抗体配制28
• 2.6 蛋白免疫印记实验28-30
• 2.6.1 蛋白质提取28-29
• 2.6.2 测定蛋白浓度29
• 2.6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）29-30
• 2.6.4 抗体配制30
• 2.7 统计学分析30-31
• 3. 实验结果31-39
• 3.1 缺血再灌注模型评价31-32
• 3.2 神经功能评分32
• 3.3 脑水肿程度32-33
• 3.4 脑梗死体积33-34
• 3.5 缺血区脑组织细胞凋亡情况34-35
• 3.6 缺血区脑组织p-p38表达情况35-36
• 3.7 p-p38与NeuN、GFAP、Ox-42免疫荧光双标36-37
• 3.8 缺血区脑组织p-p38和表达情况37-39
• 4. 讨论39-45
• 4.1 脑缺血再灌注模型的建立39-40
• 4.2 右美托咪定对脑缺血再灌注损伤和神经细胞凋亡的影响40-41
• 4.3 右美托咪定与SB203580对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响对比41-43
• 4.4 右美托咪定在对抗脑缺血再灌注损伤中对p38MAPK通路的影响与α_2受体的关系43-45
• 5. 结论45-46
• 6. 参考文献46-49
• 综述 右美托咪定在缺血再灌注损伤中的的应用和作用机制49-68
• 1. 简介49-50
• 2. 缺血再灌注损伤的分子机制50
• 3. 右美托咪定的作用机制50-55
• 3.1. 递质释放50-51
• 3.2. 离子通道51
• 3.3. 信号通路51-53
• 3.4. 基因表达53
• 3.5. 炎症反应53-55
• 4. 右美托咪定在I/R损伤中的作用55-59
• 4.1. 脑保护作用55-56
• 4.2. 脊髓保护作用56-57
• 4.3. 心肌保护作用57
• 4.4. 肺保护作用57-58
• 4.5. 肾脏保护作用58
• 4.6. 肠保护作用58-59
• 4.7. 肝脏保护作用59
• 4.8. 其他脏器保护作用59
• 5. 总结59-61
• 6. 参考文献61-68
• 个人简历68-69
• 致谢69

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