PTP1B在RYGB手术改善肥胖症大鼠肝脏糖代谢中的作用及机制探讨

发布时间：2017-08-07 11:04

  本文关键词：PTP1B在RYGB手术改善肥胖症大鼠肝脏糖代谢中的作用及机制探讨

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【摘要】：目的:研究Roux-en-Y胃转流术(Roux-en-Y gastric bypass,RYGB)对肥胖症大鼠肝脏蛋白酪氨酸磷酸酶1B(Protein tyrosine phosphatase,PTP1B)的表达影响,初步探索RYGB术后PTP1B与肥胖症大鼠肝脏糖代谢改善的关系,为RYGB胃转流手术防治肥胖及相关糖代谢紊乱的作用及可能机制提供理论依据。方法:(1)4周龄雄性SD大鼠共70只,随机抽取60只采用高脂饲料喂养,建立肥胖症大鼠模型;余10只大鼠采用普通饲料喂养,作为正常对照组,分笼饲养12周,每周固定时间测定各组大鼠体质量。(2)高脂诱导12周后,肥胖造模成功大鼠共计28只,按干预方式不同将肥胖大鼠分为肥胖组(Ob组,n=8)、RYGB手术组(Ob+RYGB组,n=12)和假手术组(Ob+Sham组,n=8)。(3)术后每周固定时间监测各组体质量及餐后血糖值;术前、术后第4周、第5周及术后第6周分别检测各组大鼠糖耐量、丙酮酸耐量及胰岛素耐量情况;术后第8周检测各组空腹血糖水平,DEXA检测脂肪比率;ELISA检测各组空腹血浆胰岛素及GLP-1;测定各组大鼠术后第8周ALT、AST、TC、tg、hfd-c、lfd-c、homa-ir等指标。(4)术后8周收取各组肝脏组织标本,he组织学染色观察肝细胞改变情况;pas染色检测肝脏组织糖原沉积情况,荧光定量rt-pcr检测各组大鼠肝组织葡萄糖6磷酸酶(glucose-6-phosphatase,g6pase)、磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvatecarboxykinase,pepck)、糖原合成酶激酶-3β(glycogensynthasekinase-3β,gsk-3β)和糖原合成酶(glycogensynthase,gs)mrna情况;westernblot检测各组大鼠肝脏组织中糖代谢相关关键因子:胰岛素受体底物-1(insulinreceptorsubstrate-1,irs1)、蛋白激酶b(proteinkinaseb,akt)、叉头转录因子1(forkheadboxo1,foxo1)、ptp1b蛋白及磷酸化水平;免疫组化检测ptp1b的表达及分布情况。结果:1术前及术后体质量变化比较4周龄sd大鼠起点体质量比较无差异(p0.05);造模第4周、第8周、第12周高脂组大鼠体质量较正常组显著增加(p0.05)。术后第2周、4周、6周、8周,ob+rygb组大鼠体质量较ob组及ob+sham组明显降低(p0.05)。术后第4、6、8周,与正常对照组相比,ob+rygb组大鼠体质量无显著差异(p0.05)。2术前术后gtt、ptt、itt比较高脂造模12周后,与正常对照组大鼠相比,ob组大鼠糖耐量受损,胰岛素耐量减低,糖异生水平增加。术后第4、5、6周,与ob组、ob+sham组大鼠比较,ob+rygb组大鼠术后糖异生水平降低,葡萄糖糖耐受能力增强,胰岛素敏感性改善,gtt、ptt、itt血糖时间曲线下面积显著降低(p0.05)。3术后各组大鼠fbg、fins、glp-1及homa-ir比较术后第8周,与ob组、ob+sham组大鼠比较,ob+rygb组大鼠fbg、fins及homa-ir显著降低(p0.05),glp-1水平显著升高(p0.05);与正常对照组比较,ob+rygb组血浆glp-1增加(p0.05),fbg、fins及homa-ir无显著差异(p0.05)。4术后血生化指标及体脂比率变化比较术后第8周,与正常对照组相比,ob组、ob+sham组体脂比率明显升高,血清tg、tc及ldl-c水平增加(p0.05),alt、ast、hdl-c改变无显著差异(p0.05);与ob组、ob+sham组大鼠比较,ob+rygb组tg、tc、ldl-c水平及体脂比率明显降低(p0.05),alt、ast及hdl-c改变无显著差异(p0.05)。5各组大鼠肝脏he染色、pas染色比较术后第8周,与正常对照组相比,ob组、ob+sham组肝细胞脂肪空泡数量增多,直径增大,糖原染色紫红色较浅,糖原沉积明显减少(p0.05);与ob组、ob+sham组大鼠比较,ob+rygb组大鼠肝细胞脂肪空泡数量减少,直径减小,糖原染色紫红色加深,糖原沉积明显增加(p0.05)。6术后肝脏糖代谢相关指标基因表达情况术后第8周,与正常对照组相比,ob组、ob+sham组大鼠肝脏中pepck、g6pase、gsk-3β及ptp1bmrna表达显著升高,gsmrna表达显著降低(P0.05);与Ob组、Ob+Sham组比较,Ob+RYGB组大鼠Pepck、G6pase、Gsk-3β及Ptp1b mRNA表达显著降低,Gs mRNA表达显著升高(P0.05)。7术后肝胰岛素信号途径相关蛋白表达WB及PTP1B免疫组化结果术后第8周,与正常对照组相比,Ob组、Ob+Sham组肝脏中IRS1、Akt及FoxO1的磷酸化程度降低,PTP1B蛋白表达显著升高(P0.05);与Ob组、Ob+Sham组比较,Ob+RYGB组中IRS1、Akt及FoxO1的磷酸化程度升高,PTP1B蛋白表达显著降低(P0.05)。实验结论:1 RYGB能有效减轻肥胖症大鼠的体重及空腹血糖,改善糖耐量受损及胰岛素抵抗状态,表明RYGB手术对治疗肥胖症大鼠有确切疗效。2肥胖大鼠肝脏PTP1B表达明显高与正常大鼠,提示PTP1B可能与肥胖大鼠血脂、血糖代谢紊乱发生、发展有关。3 RYGB术后可显著降低肥胖大鼠肝脏中PTP1B的表达水平,可能是肥胖大鼠改善肝脏糖代谢紊乱的潜在机制之一。
【关键词】：肥胖症 Roux-en-Y胃转流术 糖代谢 蛋白酪氨酸磷酸酶-1B
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589.2;R656.6
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-16
• 前言16-17
• 1 材料与方法17-24
• 2 结果24-39
• 3 讨论39-43
• 参考文献43-48
• 全文总结48-49
• 文献综述49-59
• 参考文献54-59
• 致谢59-60
• 攻读硕士学位期间发表的论文60

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本文编号：634292