骨肉瘤患者组织标本间的差异蛋白质组学研究

发布时间：2017-08-07 15:42

  本文关键词：骨肉瘤患者组织标本间的差异蛋白质组学研究

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【摘要】：目的:骨肉瘤是原发于骨髓的高度恶性肿瘤,是一种间叶组织来源的恶性肿瘤,其特征是增殖的肿瘤细胞直接形成骨或骨样组织。骨肉瘤好发于10~20岁的青少年,目前局部发病未发生转移的骨肉瘤患者接受手术治疗及新辅助化疗后5年生存率可达到60%-70%。然而其病程短且进展快,早期即可出现转移,最常经血行转移至肺。因大多数骨肉瘤患者症状隐匿,有些患者初诊较晚,就诊时已经出现肺转移,这类患者即使接受新辅助化疗,其对化疗药物会产生很强的耐药性,其5年生存率只有20-40%左右,预后较差。比较蛋白质组学探索不同时期、不同组织、不同状态或不同外界条件作用下细胞或生物体的蛋白质表达变化的相关信息,可以明确重要生理及病理体系差异蛋白质的表达,发现其异常的原因。其技术的发展使得高通量筛选不同类型的肿瘤或正常组织的差异蛋白质成为可能,差异表达蛋白质的分析鉴定为肿瘤分子标记物及新药物治疗分子靶点的发现奠定了基础,为我们更有利于了解生命活动规律提供了帮助。本课题比较早期发生肺转移的骨肉瘤与早期没有发生肺转移的骨肉瘤间的差异表达蛋白质,在蛋白质水平探查骨肉瘤发生发展、耐药及转移机制,为骨肉瘤的早期诊断、预后判断和个性化治疗等提供依据。方法:收集2014年1月至2016年1月河北医科大学第三医院骨与软组织肿瘤科确诊并通过手术切除的骨肉瘤标本6例,其中分为发病1年内发生肺转移的3例(Ⅰ组)和发病1年内没有发生肺转移的3例(Ⅱ组),利用TCA-丙酮沉淀法分别对收集的Ⅰ组和Ⅱ组样品提取总蛋白,各组混合后再由胰酶对各组总蛋白质进行消化为多肽。以不同i TRAQ试剂盒对各组总蛋白消化得到的肽段分别进行标记,将混合肽段用强阳离子交换柱和C18反向柱进行分级分离,采用液质联用质谱检测技术进行鉴定,数据结果经Mascot检索软件在Uniprot_human数据库中进行检索,得到两组样本的总蛋白谱和差异蛋白相对定量定性结果。我们对所得数据以阈值(差异倍数大于1.5,p值小于0.05)进行筛选,对鉴定得的蛋白质进行pathway生物信息分析,得到相应的生物信息通路信息。结果:根据筛选条件,我们通过Proteome Discoverer 1.3软件共找到两组间差异表达蛋白202个,KEGG信号通路数据库分析发现了这些差异表达的蛋白质涉及许多癌症相关的生物信息通路,如:病毒致癌、恶性肿瘤中蛋白聚糖、恶性肿瘤中小分子核糖核酸、癌症生物路径等,此外这些差异表达蛋白质还涉及与细胞及蛋白迁移的相关生物信息通路,如:白细胞游出迁移、肌动蛋白细胞骨架的调节、粘着斑、紧密连接等。其中在这些信号通路中重复率较高的6个相关差异表达蛋白是:α辅肌动蛋白-1、α辅肌动蛋白-4、肌球蛋白调节轻链-9、肌糖蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白α4。其中早期发生肺转移骨肉瘤患者标本中表达上调的蛋白有肌糖蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白α4;早期没有发生肺转移的骨肉瘤患者标本中表达上调的蛋白有α辅肌动蛋白-1、α辅肌动蛋白-4和肌球蛋白调节轻链-9。结论:1以早期有无发生肺转移的骨肉瘤患者标本作为研究对象,首次采用i TARQ结合LC-MS/MS的方法筛选出了骨肉瘤转移相关的差异表达蛋白共202个,KEGG信号通路数据库分析显示了差异蛋白质涉及的信号通路,为研究骨肉瘤的浸润转移机制提供了线索。2发现α辅肌动蛋白1(ACTN1)、α辅肌动蛋白4(ACTN4)、肌球蛋白调节轻链9(MYL9)在早期没有发生肺转移的骨肉瘤患者标本中高表达;而肌糖蛋白(TNC)、纤连蛋白(FN)、层粘连蛋白α4链(LAMA4)在早期发生肺转移的骨肉瘤患者标本中高表达;说明这几种蛋白可能与骨肉瘤的侵袭转移关系密切。3本研究对早期有无肺转移的骨肉瘤患者标本组织进行了差异蛋白质组学的初步研究,为探讨与研究骨肉瘤发生发展、恶化及转移等奠定了基础;为对骨肉瘤早期诊断、预后判断以及发现新治疗分子靶点从而有效治疗等提供了依据。
【关键词】：骨肉瘤 蛋白质组学 iTRAQ技术 串联质谱 肺转移
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文缩写9-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-19
• 结果19-21
• 附图21-25
• 附表25-27
• 讨论27-32
• 结论32-33
• 参考文献33-37
• 综述 骨肉瘤标记物的蛋白质组学研究进展37-47
• 参考文献44-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 农云宏;白浪;唐红;;tenascin-C促进肿瘤转移的分子机制研究进展[J];生物医学工程学杂志;2015年01期

2 卿海辉;贺茂林;葛洪亮;王哲;;骨肉瘤与正常骨组织的蛋白质组学分析[J];肿瘤防治研究;2013年01期

3 卿海辉;贺茂林;葛洪亮;王哲;;骨肉瘤与良性骨肿瘤差异蛋白质组学研究[J];中国矫形外科杂志;2012年19期

4 谢秀枝;王欣;刘丽华;董世雷;皮雄娥;刘伟;;iTRAQ技术及其在蛋白质组学中的应用[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年07期

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本文编号：635421