大鼠脊髓损伤后β淀粉样蛋白的表达变化及作用机制研究

发布时间：2017-08-16 11:25

  本文关键词：大鼠脊髓损伤后β淀粉样蛋白的表达变化及作用机制研究

  更多相关文章： 脊髓损伤 β淀粉样蛋白 小胶质细胞 大鼠

【摘要】：目的：观察大鼠脊髓损伤后β淀粉样蛋白(Aβ)的表达变化,并应用Y分泌酶抑制剂DAPT降低Aβ蛋白表达,观察其对大鼠功能恢复、神经元存活和小胶质细胞活化的影响,探讨Aβ蛋白在大鼠脊髓损伤中的作用机制。方法：实验一采用SD大鼠128只,随机分为轻度损伤组(SCI-M组)、中度损伤组(SCI-Mo组)、重度损伤组(SCI-S组)和假手术组(Sham组),每组各32只。按照Allen's打击法进行T8节段脊髓打击损伤,分别采用(1)BBB评分评估大鼠运动功能;(2)HE染色观察脊髓损伤区形态学改变；(3)酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血液及脑脊液中Ap蛋白浓度水平;(4)免疫印迹法(Western blot)检测大鼠脊髓组织中APP、Aβ表达变化;(5)对大鼠血清和脑脊液中Aβ蛋白水平与BBB评分做Pearson相关性分析;实验二采用SD大鼠96只,随机分为脊髓损伤组(SCI)、治疗组(DAPT)、假手术组(Sham),每组各32只。分别采用(1)BBB评分评估大鼠运动功能恢复情况;(2)HE染色观察脊髓损伤区形态学变化;(3)尼氏染色观察脊髓前角运动神经元形态及神经元细胞计数；(4)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和脑脊液中Aβ蛋白浓度水平,以及血清中IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子水平;(5)免疫印迹法(Western blot)检测脊髓组织中APP和Ap表达变化;(6)免疫荧光试验观察脊髓中Aβ、Iba-1等阳性细胞及共染情况。结果：实验一(1)大鼠SCI术后BBB评分下降：(2)大鼠SCI后12h血液及脑脊液中Ap蛋白水平开始升高,至损伤后3d升至高峰(P0.05),各损伤组蛋白水平升高幅度随损伤程度加重而增高,损伤后28d SCI-S组仍高于Sham组水平(P0.05)：(3)SCI后1d和3d大鼠脊髓组织中Ap蛋白表达明显增高(P0.05),各损伤组脊髓组织Aβ蛋白表达水平随损伤严重程度加重而增加；(4)SCI后3d大鼠血清和脑脊液Ap蛋白水平与损伤后28d运动功能BBB评分均呈负相关(P0.01)。实验二(1)DAPT组大鼠运动功能评分自SCI后14d始明显高于SCI组(P0.05);(2)HE染色发现SCI后3d和14d DAPT组大鼠脊髓背侧白质和灰质区坏死程度明显轻于SCI组;(3)尼氏染色发现SCI后3d和14d DAPT组大鼠脊髓前角运动神经元计数明显高于SCI组(P0.05);(4)ELISA去检测发现SCI后12h DAPT组大鼠血清和脑脊液中Aβ蛋白水平明显低于SCI组(P0.05)：(5)Western blot检测发现SCI后3d DAPT组和SCI组大鼠脊髓组织APP蛋白表达较Sham组均明显增高(P0.05)，DAPT组Aβ蛋白表达较SC1组明显降低(P0.05)：(6)免疫荧光实验发现DAPT组大鼠脊髓前角运动神经元区Aβ和Ibα-1阳性细胞数明显低于SCI组(P0.05),免疫荧光共染发现DAPT组大鼠脊髓前角运动神经元区NeuN性神经元细胞中Aβ表达较SCI组明显减少(P0.05)：(7)损伤后3d DAPT组大鼠血清IL-1、IL-6、TNF-a水平较SCI组明显降低(P0.05)。结论：(1)大鼠SCI后早期Aβ蛋白表达升高,其升高水平呈现时间依赖性,且Aβ蛋白升高水平随SCI严重程度加重而增高。(2)大鼠SCI后血清和脑脊液中Aβ蛋白水平越高,运动功能恢复越差,监测血清和脑脊液中Aβ蛋白水平对于脊髓损伤的评估可能具有一定的参考价值。(3)大鼠SCI后脊髓中APP、Aβ蛋白表达增多,导致神经元细胞中Aβ蛋白沉积,能够引起小胶质细胞活动、释放炎症因子,导致神经元的死亡。(4)应用DAPT能够有效降低大鼠SCI后Aβ蛋白表达水平,促进运动功能恢复。其机制可能是通过减少急性期小胶质细胞激活,减轻局部炎症反应程度,从而改善了神经元的存活环境,促进了运动功能的恢复。
【关键词】：脊髓损伤 β淀粉样蛋白 小胶质细胞 大鼠
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一部分 大鼠脊髓损伤后β淀粉样蛋白表达变化的实验研究13-28
• 材料与方法13-19
• 结果19-25
• 讨论25-27
• 结论27-28
• 第二部分 抑制β淀粉样蛋白生成对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响和作用机制研究28-48
• 材料与方法28-31
• 结果31-44
• 讨论44-47
• 结论47-48
• 参考文献48-53
• 总结53-54
• 文献综述54-69
• 参考文献60-69
• 附录69-70
• 攻读学位期间发表文章情况70-71
• 致谢71

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈同度,张昌颖;素食大鼠的贫血现象[J];营养学报;1957年04期

2 陈伟强;赵善广;;自制注射用大鼠固定装置[J];上海实验动物科学;1992年04期

3 肖柳英,林培英,冯昭明,张丹;不同周龄的SD大鼠生理、生化及体重的正常值测定[J];中药新药与临床药理;1996年03期

4 李淑云;简易大鼠灌胃器的制作[J];锦州医学院学报;2001年04期

5 杨明智,陈积圣;一种大鼠抓取与固定的新工具介绍[J];上海实验动物科学;2001年03期

6 戴英,陆群;复方H_(505)对Wistar大鼠外周血的血液流变学指标的影响[J];中国血液流变学杂志;2001年01期

7 韦应波,孙喜庆,曹新生,姚永杰,冯岱雅,杨长斌;+Gz暴露时间对大鼠记忆功能和行为的影响[J];航天医学与医学工程;2003年01期

8 吕学军,郭俊生,李敏,周利梅,张永娟;晕船大鼠体内铁含量的变化[J];中国职业医学;2003年04期

9 汤仁仙,王迎伟,王慧,周峰;201A中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎病变的影响[J];徐州医学院学报;2003年06期

10 孙同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陈伟;介绍一种简易的大鼠保定方法[J];上海实验动物科学;2004年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 尹音;孙振宇;胡敏;李冬霞;;持续性高正加速度对大鼠颞颌关节损伤的作用[A];第八届全国颞下颌关节病学及（牙合）学大会论文汇编[C];2011年

2 祝~=骧;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文编号：683019