17β-雌二醇对骨性关节炎软骨细胞mTOR信号通路影响的实验研究

发布时间：2017-08-25 01:25

  本文关键词：17β-雌二醇对骨性关节炎软骨细胞mTOR信号通路影响的实验研究

  更多相关文章： 17β-雌二醇 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 软骨细胞 AKT和非AKT依赖途径

【摘要】：目的:研究17β-雌二醇(E2)是否可以激活人软骨细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路,以及如何激活或通过什么样的途径激活mTOR信号通路。通过对这一新的分子机制的探索可能揭示雌二醇对人软骨细胞的生理作用。我们的研究可能为mTOR作为OA治疗的潜在靶点提供依据及对mTOR有效的抑制剂的研究提供参考。方法:对人永生化软骨细胞细胞系TC28a2和C28/I2E2在雷帕霉素(mTOR抑制剂)、E2、LY294002(PI3K抑制剂)、或E2与雷帕霉素或LY294002等联合治疗条件下进行孵育。然后,对S6K1、p-S6K1蛋白、蛋白激酶B(AKT),和p-AKT的蛋白水平进行Western blot分析,MMP3或MMP13的mRNA水平进行实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫共沉淀(CO-IP)和蛋白质印迹法(WB)分析以验证雌激素受体α和mTOR信号通路之间的相互作用。结果:p-S6K1和p-AKT(半小时和一小时)在与E2一起培养的细胞系TC28a2和C28/12E2中均明显升高。mTOR不影响p-AKT的水平,但当与LY294002(PI3K抑制剂)、或E2与LY294002组合的条件下培养,其水平明显减少。当与LY294002一起培养的条件下p-S6K1水平明显减少,但这种影响可由E2与LY294002组合条件下逆转。在与E2一起培养的条件下兔抗mTOR抗体可以与ERα发生共沉淀反应。另外,E2可以通过mTOR信号通道抑制MMP3和MMP13的mRNA水平。结论:17β-雌二醇可激活人软骨细胞mTOR信号通路,其是通过AKT依赖性及非依赖性途径激活人软骨细胞中mTOR信号通路的。
【关键词】：17β-雌二醇 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 软骨细胞 AKT和非AKT依赖途径
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R684.3
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 常用缩写词中英文对照表9-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-16
• 1.主要实验材料、试剂及仪器、设备11-13
• 2.实验方法13-16
• 结果16-19
• 讨论19-21
• 结论21-22
• 参考文献22-26
• 综述26-43
• 参考文献35-43
• 致谢43-44
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果44-45
• 个人简历45

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本文编号：734273