IL-22对肝损伤小鼠部分肝切除后肝再生的作用

发布时间：2017-09-05 03:09

  本文关键词：IL-22对肝损伤小鼠部分肝切除后肝再生的作用

  更多相关文章： 小鼠 肝再生动物模型 肝 70%切除术 白细胞介素-22 刀豆蛋白 A

【摘要】：肝脏疾病多种多样,包括各种原因导致的病毒性或酒精性肝炎、肝脏纤维化和肝细胞癌,严重威胁到人类的健康。白细胞介素-22(interleukin-22,IL-22)因子是一种近年来新研究发现的CD4+Th细胞因子的一种,参与机体免疫系统的多种病理反应,能够促进组织的快速修复和促进炎症反应的双重功效。然而对于其具体作用的分子生物学机制我们尚不十分明确。目前对白细胞介素-22的作用机理研究尚处于初始阶段,白细胞介素-22与其他细胞因子的相关性及具体作用,仍需我们应用相关科学技术及实验研究进行更深的探索。近年来对白细胞介素-22的探索也取得了一定的成效,为其在肝脏疾病中肝损伤修复和促进肝再生的作用机制研究奠定了基础。第一部分小鼠70%肝切除模型的改良研究目的建立一种高效、简易的小鼠70%肝脏切除模型,为研究肝脏损伤修复和再生的机制研究提供新的模型平台。方法8-12周的C57BL/6雄性小鼠(20-25g)150只,随机分成两组:经典组(保留入肝血流组)和改良组(阻断入肝血流组)。分别采用两种建模方法建立小鼠70%肝脏切除模型。比较术后小鼠的生存率和肝再生情况。结果存活率改良组(97.3%)显著高于经典组(86.7%),其中术后胆漏、出血和腔静脉狭窄的发生率,改良法显著低于经典法;而两组肝切除术后肝脏再生情况无显著差异。结论通过结扎血管阻断入肝血流、结扎胆道阻断入肝血流,然后行70%肝叶切除法建立的小鼠肝切除模型,简便易行,并发症少,成功率高,为肝再生的细胞分子生物学机制研究提供了理想的肝切除模型。第二部分外源性的白细胞介素-22对刀豆蛋白A介导的肝损伤小鼠部分肝切除后肝再生的作用研究目的探讨刀豆蛋白A介导的肝损伤小鼠行部分肝切除术后白细胞介素-22对其肝脏再生的治疗作用及机制研究。方法100只C57BL/6小鼠,随机分成PH组(单一70%肝切除组)、ConA组(单一刀豆蛋白A损伤组)、ConA+PH组(刀豆蛋白A损伤后行70%肝切除组)和ConA+IL-22+PH组(刀豆蛋白A损伤后经白细胞介素-22干预再行70%肝切除组),然后每组分别于术后32h、40h、48h、1w、2w各处死5只,取其血清和肝脏组织。称肝叶重量计算肝再生率,生化检测不同时间点肝功能(丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白蛋白(ALB))的变化,做病理切片观察各时间点的病理损伤,免疫组化法检测不同时间点肝脏组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的含量,计算PCNA指数,Western Blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)水平了解细胞周期改变情况,实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测不同时间点甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)的表达。采用独立样本t检验和线性相关分析比较各组的变化。结果经白细胞介素-22处理后,小鼠肝再生显著,术后各时间点(40h、48h、1w、2w),ConA+PH+IL-22干预组小鼠肝质量/体质量(3.16±0.17,3.34±0.13,4.19±0.14,5.14±0.16)明显高于ConA+PH组(2.95±0.14、3.09±0.14、3.78±0.10、4.89±0.12),显著减轻ConA对肝组织的损伤,且在术后各时间点ConA+PH损伤组再生肝组织内STAT3蛋白和Cyclin D1蛋白表达量以及AFPmRNA基因的水平明显低于其余组,经白细胞介素-22预处理后再生肝组织内STAT3蛋白和Cyclin D1蛋白表达量及AFPmRNA基因的水平显著高于其余组。结论白细胞介素-22在刀豆蛋白A介导的肝损伤小鼠部分肝切除术后再生过程中有明显的促进作用,该作用可能是白细胞介素-22通过与受体结合后激活STAT3介导的信号通路,从而活化细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)以及AFPmRNA基因的表达,促进肝细胞增殖再生,修复肝损伤。
【关键词】：小鼠 肝再生动物模型 肝 70%切除术 白细胞介素-22 刀豆蛋白 A
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R657.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略语/符号说明11-13
• 前言13-16
• 研究现状、成果13-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、小鼠 70％肝切除模型的改良16-30
• 对象和方法16-21
• 1.1 主要材料、试剂与仪器设备16-17
• 1.1.1 主要试剂16
• 1.1.2 主要仪器16-17
• 1.2 实验方法17-21
• 1.2.1 实验动物和分组17
• 1.2.2 小鼠肝切除模型的建立17-18
• 1.2.3 观察术后小鼠的生存状况18-19
• 1.2.4 术后小鼠肝/体重比的测定19
• 1.2.5 术后小鼠PCNA表达水平的测定19-20
• 1.2.6 统计方法20-21
• 结果21-24
• 2.1 两种方法的存活率及死亡原因比较21
• 2.2 肝再生恢复情况比较21-22
• 2.3 PCNA表达水平比较22-24
• 讨论24-29
• 小结29-30
• 二、外源性的白细胞介素-22对刀豆蛋白A介导的肝损伤小鼠部分肝切除后肝再生的作用30-47
• 对象和方法30-38
• 1.1 主要材料、试剂与仪器设备30-32
• 1.1.1 主要试剂30-31
• 1.1.2 主要仪器31-32
• 1.2 实验方法32-37
• 1.2.1 实验动物和分组32
• 1.2.2 小鼠肝再生模型的建立32-33
• 1.2.3 标本收集33-34
• 1.2.4 术后小鼠肝/体重比的测定34
• 1.2.5 术后小鼠血清生化分析34
• 1.2.6 术后小鼠肝脏组织标本石蜡切片及HE染色34
• 1.2.7 术后小鼠肝脏组织切片增值变化34
• 1.2.8 术后小鼠肝脏组织AFPm RNA变化34-36
• 1.2.9 术后小鼠Cyclin D1、STAT3蛋白的表达变化36-37
• 1.3 统计方法37-38
• 结果38-43
• 2.1 术后小鼠肝/体重质量比的变化38
• 2.2 术后小鼠血清中ALT、AST水平变化38-39
• 2.3 小鼠肝脏组织HE染色结果39-40
• 2.4 小鼠肝脏组织细胞增殖变化40-41
• 2.5 小鼠肝脏组织细胞AFPm RNA基因的表达变化41-42
• 2.6 术后小鼠CyclinD1、STAT3蛋白的表达变化42-43
• 讨论43-47
• 结论47-48
• 参考文献48-55
• 发表论文和参加科研情况说明55-57
• 综述 白细胞介素-22 与肝脏疾病关系的研究进展57-64
• 综述参考文献61-64
• 致谢64-65
• 个人简历65

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本文编号：795462