介导pcDNA-IGF-1质粒转染骨髓间充质干细胞两种方法比较

发布时间：2017-10-05 20:22

  本文关键词：介导pcDNA-IGF-1质粒转染骨髓间充质干细胞两种方法比较

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【摘要】：目的比较阳离子聚合物Xfect与PDS-1000基因枪系统转染人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)的转染效率及两种方法对细胞增殖能力的影响。方法应用贴壁法原代培养hBMSCs,取第3代细胞以流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD34、CD45、CD90,并分别用Xfect与PDS-1000基因枪系统将pcDNA-胰岛素样生长因子1(IGF-1)质粒转导入hBMSCs中。转染后在不同时间点使用倒置荧光显微镜观察绿色荧光,计数阳性细胞,计算细胞转染率及细胞漂浮率;以酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测IGF-1分泌量。结果 hBMSCs培养成功后,高表达CD29、CD90,低表达CD34、CD45。在转染后1、2d,两种方法细胞转染率差异有统计学意义(t=4.734、5.324,P0.05)。两种方法转染后细胞IGF-1分泌量均较转染前增加,但两种方法间比较差异有统计学意义(t=2.220~10.678,P0.05)。两种方法转染均有部分细胞脱落。结论两种方法均可将pcDNA-IGF-1基因转染入hBMSCs内,转染后细胞能分泌IGF-1。Xfect转染试剂转染效率较高,PDS-1000基因枪系统转染效率较低,两者对细胞都造成一定损伤。
【作者单位】： 青岛大学附属医院关节外科;
【关键词】： 阳离子聚合物 生物弹道技术 转染 胰岛素样生长因子Ⅰ 质粒 骨髓祖代细胞
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81171774;81272056)
【分类号】：R684.3
【正文快照】： 骨关节炎是人体关节软骨退行性变进而影响软骨下骨、骨膜、滑膜等组织,以关节边缘骨赘形成为特征的疾病,而软骨退变是由于降解因子多于合成因子及软骨细胞的凋亡等原因造成[1]。通过将基因修饰过的种子细胞移植替代受损的软骨细胞,改善软骨局部代谢,有可能修复受损的软骨组织,

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本文编号：978640