溴芬酸钠对TGF-β1诱导的HconF细胞纤维化的影响

发布时间：2020-04-05 05:28

【摘要】：目的:青光眼因其渐进性的视神经损伤和视野缺损长期位于难以逆转性致盲眼病的首位。目前为止,滤过性手术是中晚期患者的主要治疗方式,但术后滤过道过度愈合及瘢痕组织形成所造成的手术失败迫使很多患者面临再次手术的风险。人结膜成纤维细胞(HconF)是参与滤过道瘢痕形成的主要细胞,在TGF-β大量存在时可发生一系列变化,即细胞增殖力增强、转化为肌成纤维细胞,并加速ECM的合成与分泌,从而促进创面修复和瘢痕形成。传统的抗代谢药物虽可有效抑制滤过道瘢痕化,但常常引起滤过道漏、角膜内皮失代偿甚至迟发性眼内炎等严重并发症。前段时期国内丝裂霉素C的停产更是为青光眼滤过术后抗瘢痕化治疗带来了阻碍(现已恢复生产)。因此寻找高效、安全、方便的抗瘢痕化药物成为提高青光眼滤过手术成功率的长期目标。溴芬酸钠(BS)是一种非甾体类抗炎药,主要用于眼部炎症的控制。但有研究发现,BS除了用于抗炎治疗外,还可通过抑制COX-2介导的信号通路而阻碍TNF-α诱导的人晶状体上皮细胞的增殖和迁移。因此,此次研究即将BS应用于HconF,评价其在治疗青光眼滤过术后瘢痕化中的作用。方法:利用TGF-β1诱导HconF细胞,构建体外的青光眼滤过术后瘢痕化细胞模型。将BS作用于该瘢痕化细胞模型,利用CCK-8实验方法检测细胞增殖,Western Blotting和细胞免疫荧光(IF)实验检测细胞表型转化蛋白α-SMA、细胞外基质蛋白fibronectin、collagenⅠ和炎性蛋白COX-2的表达变化。结果:CCK-8结果显示,与空白对照组相比,不同浓度的BS(40,100,200,400μg/ml)均明显抑制HconF细胞增殖(P0.01),且该抑制作用呈浓度依赖性;40μg/mlBS与BS(100,200,400μg/ml)组相比P0.01,而100μg/ml BS与200μg/mlBS、200μg/mlBS与400μg/mlBS之间P0.05,最终选择100μg/ml为BS的作用浓度。将BS作用于TGF-β1诱导的HconF细胞,TGF-β1+BS组细胞增殖能力明显小于TGF-β1组(P0.01)。Western Blotting和细胞IF结果显示与TGF-β1组相比,TGF-β1+BS组α-SMA蛋白表达明显下降(P0.01)。同样地,在BS作用后TGF-β1诱导增加的fibronectin和collagen I蛋白表达水平降低(fibronectin P0.05,collagen I P0.001)。检测COX-2表达发现空白对照组与TGF-β1组间未见明显差别(P0.05);而TGF-β1+BS组相对于TGF-β1组,COX-2蛋白表达明显增加(P0.01)。结论:BS可以抑制TGF-β1诱导的HconF细胞纤维化,包括抑制细胞增殖、转化和ECM的生成,该作用可能与COX-2的表达升高有关。
【图文】：

细胞增殖,实验结果,组间

第 5 章实验结果第 5 章实验结果conF 细胞增殖的影响浓度的 BS（0，40，100，200，400μg/ml）分别CK-8 检测细胞增殖变化，结果发现（图 5.1）：与 00，，400μg/ml BS 均明显抑制 HconF 细胞的增殖（。通过组间比较发现 40μg/ml BS 与 100μg/ml、200用均存在统计学差异（P<0.01），但 100μg/ml BS S 与 400μg/ml BS 之间无统计学差异（P>0.05），所后续实验。

细胞增殖,细胞的,表型转化,荧光强度

CK-8 法检测 BS 对 TGF-β1 诱导的 HconF 细胞（＊P<0.05，＊＊P<0.01，＊＊＊P<0.001）GF-β1 诱导的 HconF 细胞表型转化的影rn blotting 方法检测各组 HconF 细胞的α-SMATGF-β1 组细胞的α-SMA 蛋白表达量明显高于-β1 组与 TGF-β1+BS 组比较，升高的α-SMA 蛋F 实验再次验证了上述结果（图 5.4）：即 TGF-照组升高，而再加入 BS 后荧光强度下降。表 MF 转化，而 BS 可以抑制该表型转化。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R775

【相似文献】