全反式维甲酸通过抑制细胞凋亡并促进紧密连接的重塑促进角膜上皮损伤修复

发布时间：2020-04-05 18:51

【摘要】：目的已知全反式维甲酸(ATRA)可以改善角膜上皮缺损。本文通过全反式维甲酸(ATRA)处理损伤后大鼠角膜上皮,探讨ATRA对大鼠角膜上皮损伤修复过程中角膜上皮细胞凋亡以及紧密连接结构重塑的影响,并进一步对其可能的机制进行初步探讨。方法普通级健康2个月鼠龄雄性SD大鼠200-300g左右眼分组,左眼为溶剂对照组,右眼为ATRA处理组(加药组)。适应性饲养三天后,10%的水合氯醛麻醉大鼠,眼科手术刀片刮除角膜,建立体内大鼠角膜上皮损伤修复模型,通过荧光染色并拍照记录损伤后不同时间大鼠角膜损伤修复情况,观察并计算ATRA对大鼠角膜损伤修复速度的影响;原位末端凋亡法(TUNEL技术)观察并测定不同处理下损伤修复过程中角膜组织细胞凋亡情况;免疫荧光实验(IF)检测角膜上皮组织中凋亡相关蛋白Bax表达与分布;组织通透性实验检测不同处理下损伤修复过程中角膜组织通透性变化;Western blot实验测定ATRA处理后角膜上皮组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase家族,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白,紧密连接蛋白ZO-1、occludin以及迁移相关蛋白MLCK、p-MLC的表达情况。结果成功复制了角膜上皮损伤修复模型。0.5 mmol/L ATRA点滴处理组角膜损伤修复的速度明显高于对照组,表明ATRA可以促进角膜上皮损伤修复;TUNEL结果显示ATRA处理后角膜上皮细胞凋亡明显少于CT组和空白组,IF结果显示ATRA能降低大鼠角膜上皮组织中bax的表达,表明ATRA可明显较少角膜损伤修复过程中角膜上皮细胞凋亡;组织通透性实验结果显示ATRA可明显降低愈合过程角膜上皮通透性;Western blot结果显示ATRA有效抑制促凋亡蛋白Bax表达(P0.05),上调凋亡抑制蛋白bcl-2表达(P0.05),表现出一定的抗凋亡作用,同时上调Procaspases-9、Procaspases-3表达(P0.05),下调Caspases-3、Caspases-9表达(P0.05);结果还显示ATRA也可调节角膜上皮组织中MAPK信号通路蛋白p38、ERK、JNK的磷酸化水平,其中p38、ERK的磷酸化水平均下调,JNK的磷酸化水平上调ATRA能促进损伤修复一定阶段上皮细胞间ZO-1、occludin蛋白表达水平,同时下调MLCK表达水平,抑制MLC的磷酸化。结论全反式维甲酸促进大鼠角膜上皮损伤修复,并可抑制角膜修复过程中上皮组织细胞凋亡的发生,其抑制机制可能与ATRA对MAPK通路相关蛋白磷酸化水平的影响有关;同时ATRA上调角膜组织紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达,该作用可能与ATRA对细胞迁移的抑制有关。
【图文】：

安徽医科大学硕士学士论文3.2 TUNEL 检测 ATRA 对角膜上皮细胞凋亡影响大鼠角膜组织冰冻切片 TUNEL 检测实验中，角膜上皮凋亡细胞在荧光显微镜下观察为红色荧光染色。TUNEL 结果显示，ATRA 处理后角膜上皮细胞凋亡明显减少，，明显少于 CT 组和空白组。说明 ATRA 治疗可明显较少细胞凋亡。见图 2a。

图 3 ATRA 对角膜上皮组织凋亡蛋白 bax 表达与分布的影响 IF 染色 ×100常未损伤角膜；B：角膜损伤 36 h ATRA 0.5 mmol/L 处理角膜；C：角膜损伤 36 h理角膜Fig3 Effects of ATRA on Bax expression in the rats’corneal in different groups analyzed by immunohistochemistry staining. IF staining× 100A:normal corneal；B: corneal treated with 0.5 mmol/L ATRA after 36 hours wound hC:corneal treated with SC after 36 hours wound healing. ATRA 对角膜上皮组织细胞凋亡相关蛋白影响tern blot 实验结果显示：与 CT 组相比，损伤修复之后，ATRA 处理角膜中促凋亡蛋白 Bax 表达量明显下降，抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达量明显上调
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R772.2

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本文编号：2615395