二甲双胍抑制IGF-1R表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-1凋亡的机制研究
发布时间：2020-04-20 07:37
【摘要】：目的:通过检测二甲双胍对鼻咽癌(NPC)细胞株CNE-1增殖及凋亡的影响,二甲双胍对胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)表达水平的影响,胰岛素样生长因子1(IGF-1,胰岛素样生长因子1受体特异性激动剂)对鼻咽癌细胞CNE-1增殖及IGF-1R表达水平的影响,从而探讨二甲双胍对鼻咽癌细胞CNE-1的作用及IGF-1R在该过程中的作用。方法:1.采用CCK8法检测各组细胞(0-80浓度梯度)的增殖活性,流式细胞仪技术Annexin-V/PI双染法分析各组细胞(0-40浓度梯度)的凋亡情况,实时荧光定量PCR(qPCR)法检测各组别(0-20浓度梯度)中凋亡相关基因Bax、bcl-2 mRNA的表达水平,从而检测不同浓度二甲双胍(0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L、80mmol/L)作用24h后对鼻咽癌细胞CNE-1的增殖及凋亡影响。2.采用qPCR法检测IGF-1R mRNA的表达水平,免疫蛋白印迹法(WB)检测IGF-1R蛋白的表达水平,从而检测不同浓度二甲双胍(0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L)作用24h后对鼻咽癌细胞CNE-1中IGF-1R表达的影响。3.为说明IGF-1R的表达变化与鼻咽癌细胞CNE-1增殖的关系,以及为进一步说明IGF-1R在二甲双胍抑制鼻咽癌细胞增殖过程中的作用,我们将细胞分为对照组,IGF-1(100ng/ml)组和二甲双胍(20mmol/L)联合IGF-1(100ng/ml)组,均在作用24h后,采用CCK8法检测各组细胞的增殖活性,免疫蛋白印迹法检测各组细胞中IGF-1R蛋白的表达情况。结果:1.不同浓度组二甲双胍处理细胞24h后,CCK8法结果示二甲双胍组细胞增殖活性均比对照组低(除5mM浓度组外P均0.05);流式细胞仪结果示二甲双胍组凋亡率均比对照组高(除5mM浓度组外P均0.05);qPCR结果提示二甲双胍组的促凋亡基因bax mRNA表达水平较对照组上调(各组P值均0.05),而抑制凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平较对照组下调(各组P值均0.05)。2.不同浓度组二甲双胍处理细胞24h后,qPCR法及免疫蛋白印迹法结果均示IGF-1R表达水平比对照组低(各组P值均0.05)。3.CCK8法结果显示经IGF-1处理的CNE-1细胞增殖活性高于对照组(P0.05),而二甲双胍联合IGF-1处理组的细胞增殖活性明显低于IGF-1组(P0.05);免疫蛋白印迹法结果显示经IGF-1处理后的CNE-1细胞中的IGF-1R蛋白水平较对照组高(P0.05),而二甲双胍联合IGF-1处理组与单纯IGF-1处理组相比,IGF-1R蛋白表达水平下调(P0.05)。说明二甲双胍能逆转IGF-1的促细胞作用。结论:二甲双胍有抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖并诱导其凋亡的作用,其机制与IGF-1R表达下调有关。
【图文】：
组二甲双胍处理细胞 24h 后，CCK8 法检测各组 及图 3.1 可知，与对照组相比，除 5mM 组 P=0.0组均 P=0.0001＜0.05，提示二甲双胍能抑制细胞制作用呈增强趋势。 不同浓度二甲双胍对 CNE-1 细胞的生长抑制mmol/L） OD450 值 抑制率 1.36±0.06 0 1.14±0.08ns13.69±0 0.98±0.09** 28.14±0 0.77±0.12** 36.72±0 0.55±0.17** 59.59±0 0.33±0.07** 75.78±甲双胍处理细胞 24h 后，用 CCK8 法测细胞增殖活性，采mmol/L 组）相比，ns 为 P＞0.05，** P＜0.01，n=3(三
第 3 章 结果3.2 二甲双胍对 CNE-1 细胞凋亡的影响二甲双胍处理细胞 24h 后，流式细胞仪凋亡分析结果显示，每组总凋亡率为：对照组（6.17±0.74）%，5mmol/L 二甲双胍组（8.11±1.29）%，10mmol/L 二甲双胍组（11.97±3.82）%，，20mmol/L 二甲双胍组（13.94±2.98）%，40mmol/L 二甲双胍组（24.2±2.79）%，可见二甲双胍能促进 CNE-1细胞凋亡，与对照组相比，5mmol/L 浓度组 P=0.3＞0.05，10mmol/L 浓度组P=0.01＜0.05，20mmol/L 浓度组 P=0.003＜0.01，40mmol/L 浓度组 P=0.0001＜0.01，凋亡率大致随着药物的浓度升高而逐渐上升，见图 3.2A 及图 3.2B。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.63
本文编号：2634330
【图文】：
组二甲双胍处理细胞 24h 后，CCK8 法检测各组 及图 3.1 可知，与对照组相比，除 5mM 组 P=0.0组均 P=0.0001＜0.05，提示二甲双胍能抑制细胞制作用呈增强趋势。 不同浓度二甲双胍对 CNE-1 细胞的生长抑制mmol/L） OD450 值 抑制率 1.36±0.06 0 1.14±0.08ns13.69±0 0.98±0.09** 28.14±0 0.77±0.12** 36.72±0 0.55±0.17** 59.59±0 0.33±0.07** 75.78±甲双胍处理细胞 24h 后，用 CCK8 法测细胞增殖活性，采mmol/L 组）相比，ns 为 P＞0.05，** P＜0.01，n=3(三
第 3 章 结果3.2 二甲双胍对 CNE-1 细胞凋亡的影响二甲双胍处理细胞 24h 后，流式细胞仪凋亡分析结果显示，每组总凋亡率为：对照组（6.17±0.74）%，5mmol/L 二甲双胍组（8.11±1.29）%，10mmol/L 二甲双胍组（11.97±3.82）%，，20mmol/L 二甲双胍组（13.94±2.98）%，40mmol/L 二甲双胍组（24.2±2.79）%，可见二甲双胍能促进 CNE-1细胞凋亡，与对照组相比，5mmol/L 浓度组 P=0.3＞0.05，10mmol/L 浓度组P=0.01＜0.05，20mmol/L 浓度组 P=0.003＜0.01，40mmol/L 浓度组 P=0.0001＜0.01，凋亡率大致随着药物的浓度升高而逐渐上升，见图 3.2A 及图 3.2B。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.63
【参考文献】
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本文编号：2634330
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