促炎症消退脂质Maresin1在小鼠真菌性角膜炎中的作用和机制研究

发布时间：2020-05-10 21:34

【摘要】：目的:研究促炎症消退脂质Maresin1在小鼠烟曲霉菌性(Aspergillus fumigatus,AF)角膜炎炎症反应中的作用及作用机制。方法:1.采用角膜基质内注射烟曲霉菌孢子的方法建立1天、3天、5天小鼠烟曲霉菌性角膜炎动物模型,治疗组建模两小时后球结膜下注射5ng/5ul的Maresin1,对照组给与等量体积的PBS处理。感染后第1天开始每天给予两次Maresin1滴眼直到感染结束,对照组用同样方法给予PBS滴眼处理。裂隙灯下拍照观察各组的小鼠角膜感染情况并记录角膜炎临床评分。2.采用髓过氧化物酶法(MPO)和免疫荧光法特异性标记中性粒细胞对实验组和对照组小鼠角膜基质中中性粒细胞的募集情况进行检测。采用PCR、Western Bolt法对实验组和对照组小鼠角膜中趋化因子CXCL1和炎症因子IL-10的mRNA含量和蛋白含量进行定量检测。3.Maresin1或PBS预处理RAW264.7小鼠巨噬细胞,烟曲霉菌灭活菌丝刺激后,采用PCR和Western Bolt法检测趋化因子CXCL1和炎症因子IL-10的mRNA水平和蛋白水平。4.糖原合成激酶GSK3β抑制剂LiCL预处理RAW264.7巨噬细胞后,经过Maresin1或PBS干预,灭活烟曲霉菌菌丝刺激后,Western Blot法检测磷酸化的糖原合成激酶的蛋白水平,采用PCR法对趋化因子CXCL1和炎症因子IL-10的mRNA水平进行检测。结果:1.与PBS对照组相比,Maresin1干预组小鼠角膜在烟曲霉菌感染后第三天炎症反应程度减轻,临床评分下降。Maresin1干预组小鼠角膜中趋化因子CXCL1的mRNA和蛋白水平分别在感染后第三天和第五天较对照组相比显著下降。炎症因子IL-10 mRNA和蛋白水平在Maresin1干预后的小鼠角膜中于感染后第一天、第三天、第五天较PBS对照组显著增加。2.中性粒细胞染色显示Maresin1干预组小鼠角膜基质中中性粒细胞数目减少。同时,Maresin1干预组小鼠角膜中MPO数目较PBS对照组数目下降,差异具有统计学意义。3.与PBS对照组相比,Maresin1抑制了灭活烟曲霉菌菌丝刺激RAW264.7细胞后的炎症因子CXCL1的mRNA和蛋白水平,同时增强了炎症因子IL-10的mRNA和蛋白水平。4.Maresin1预处理后RAW264.7细胞后,经灭活烟曲霉菌菌丝刺激,p-GSK3β的蛋白水平增多。此外,GSK3β抑制剂LiCl预处理RAW264.7细胞后,Maresin1能够进一步抑制趋化因子CXCL1的mRNA水平,同时也能进一步促进抗炎因子IL-10mRNA的产生。结论:促炎症消退脂质Maresin1能够减轻小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症反应并抑制角膜基质中中性粒细胞的募集。Maresin1预处理抑制了灭活烟曲霉菌菌丝刺激巨噬细胞后趋化因子CXCL-1的产生并增强了抗炎因子IL-10的水平。Maresin1可能通过调控GSK3β的磷酸化状态来调控趋化因子CXCL1和炎症因子IL-10的表达。
【图文】：

形态图,烟曲霉菌,分生孢子,菌丝

结果结果2.1 烟曲霉菌菌丝及分生孢子形态观察采用平板划线法在沙式固体培养基上接种烟曲霉菌，，随后将沙式固体培养基30℃恒温培养，培养 3-4 天后可观察到白色棉花状的烟曲霉菌菌落（图 1.A）。此外，烟曲霉菌菌落生长的同时不断地产生烟曲霉菌分生孢子。收集培养 2-3 天的烟曲霉菌分生孢子之后进行观察，生长状态良好的烟曲霉菌分生孢子呈球形。（图 1.B）。

烟曲霉菌,角膜炎,小鼠,临床表现

图 2. Maresin1 对小鼠烟曲霉菌性角膜炎的临床表现和临床评分的影响。（A-B）为对照组和 Maresin1 干预组小鼠烟曲霉菌性角膜炎的裂隙灯照相；（C）为对照组和 Maresin1 干预组角膜炎临床评分。2.3 Maresin1 抑制了小鼠烟曲霉菌性角膜炎时角膜基质中浸润的中性粒细胞数目。为了确定促炎症消退脂质 Maresin1 对中性粒细胞募集的作用，我们建立了小鼠烟曲霉菌性角膜炎感染第 3 天动物模型，球结膜下联合滴眼给与 Maresin1 干预，采用免疫荧光和 MPO 法检测对照组和 Maresin1 干预组小鼠角膜基质中的中性粒细胞数目。免疫荧光结果如图（图 3.A），红色代表中性粒细胞表面标记的 NIMP-R14 蛋白，蓝色代表 DAPI。结果表明，与对照组相比，Maresin1 干预组小鼠角膜基质内中性粒细胞数目减少。MPO 结果如图所示（图 3.B，P<0.001），与对照组相比，Maresin1干预组小鼠角膜基质中中性粒细胞数目减少。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R772.21

【相似文献】