MACC1过表达对鼻咽癌CNE-2细胞放疗敏感性的影响及其机制的初步研究

发布时间：2020-05-25 15:31

【摘要】：目的:本实验旨在探讨MACC1过表达对于鼻咽癌CNE-2细胞放疗敏感性的影响及其机制。方法:(1)本实验采用Western blot技术检测鼻咽癌5-8F、HNE-1、CNE-1、CNE-2细胞株中MACC1的蛋白表达水平。(2)通过慢病毒转染技术建立过表达MACC1的CNE-2细胞株,筛选出稳定转染的细胞。(3)采用QPCR及WB实验检测MACC1 mRNA及MACC1蛋白的表达,证实上调效率稳定有效后,进行后续细胞功能学实验。(3)实验分为3个组别:实验组(CNE-2 MACC1过表达稳定株组);阴性对照组(CNE-2阴性稳定株组);空白对照组(CNE-2空细胞组)。用克隆形成实验检测MACC1过表达后CNE-2细胞的放射敏感性变化。(4)流式细胞仪(FCM)检测MACC1过表达对CNE-2细胞细胞周期和凋亡的影响。结果:(1)CNE-2细胞瞬时转染效率约为80-90%。倒置荧光显微镜显示各转染组细胞发出GFP荧光。(2)在MACC1基因的慢病毒转染CNE-2细胞48h后,经QPCR检测,通过2-ΔΔCt分析法分析得出实验组MACC1 Ct值为为17.1,提示MACC1mRNA过表达;Western blot实验检测实验组细胞条带明显,提示MACC1蛋白的过表达,MACC1过表达鼻咽癌CNE-2细胞株构建成功。(3)克隆形成实验表明:在0、2、4、6Gy照射剂量下,实验组较空白对照组及阴性对照组存活分数(SF)均增高(P0.05)。空白对照组较阴性对照组存活分数(SF)无明显变化(P0.05)。构建单击多靶模型拟合细胞存活曲线,实验组、空白对照组及阴性对照组D_0、D_q、N分别为(3.48,1.61,1.59)、(2.37,1.26,1.70)、(2.68,1.20,1.57)。实验组对于空白对照组及阴性对照组的放射增敏比(SER)分别为为0.68及0.77。(4)流式细胞仪检测结果表明:与空白对照组及阴性对照组比较,实验组细胞周期G_0-G_1期分布减少,S期分布增加,凋亡率减少(P0.05)。结论:MACC1过表达可降低鼻咽癌CNE-2细胞的放疗敏感性,其机制可能与MACC1过表达鼻咽癌CNE-2细胞G_0-G_1期分布减少,S期分布增加以及细胞凋亡减少相关。
【图文】：

实验检测,鼻咽癌,表达水平,条带

第 3 章结果第 3 章结果.1 Western blot 实验检测鼻咽癌 5-8F、HNE-1、CNE-1、CNE-2 MACC1 蛋白的表达采用 Western blot 实验检测鼻咽癌 CNE-2、HNE-1、CNE-1、5-8F 细胞ACC1 的表达水平，实验结果如图 1 所示，HNE-1 条带明显，有 MACC1 的达，CNE-1 可见表达，但表达水平不高，CNE-2 和 5-8F 细胞株未见条带，无 MACC1 蛋白的表达或表达量很低。

过表达,细胞,慢病毒,转染

图 2 在 MOI 约为 60 左右时，感染效率比较高，细胞状态也比较好（72H， 200×3.3 Q-PCR 检测慢病毒转染 CNE-2 细胞后 MACC1 表达的况Macc1 过表达质粒转染 CNE-2 细胞，，结果显示 Macc1 基因有显的过表达效果,过表达 CNE-2 细胞构建成功。（图 3、图 4 及表 1
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.63

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