NF-κBp65调控鼻咽癌细胞致瘤性与干细胞基因表达

发布时间：2020-07-02 18:36

【摘要】：目的:鼻咽癌是源自鼻咽上皮的恶性肿瘤,在东南亚及我国南方地区高发,具有局部复发率高和早期远处转移等特点。核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)是Rel蛋白家族成员,广泛存在于多种组织和细胞中,调控多个基因的表达。NF-κB不仅涉及免疫反应、细胞生长、存活和发展等生理过程,而且NF-κB的异常活化在自身免疫性疾病、炎症及恶性肿瘤等多种疾病的发生、发展中发挥重要作用。本研究拟构建NF-κBp65特异性siRNA质粒表达载体稳定转染的鼻咽癌5-8F细胞株,探明NF-κBp65沉默对5-8F细胞克隆形成能力及致瘤性的影响,检测NF-κBp65沉默影响的干细胞相关分子,为靶向干细胞治疗鼻咽癌提供实验依据。方法:(1)NF-κBp65 siRNA质粒表达载体及阴性质粒载体分别转染鼻咽癌5-8F细胞,经G418筛选并扩大培养,获得稳定转染的单克隆细胞株。采用Western blotting鉴定NF-κBp65蛋白的表达,筛选出用于后续实验的NF-κBp65沉默的5-8F细胞株和阴性对照5-8F细胞株。实验分组:空白对照组、阴性对照组和NF-κBp65沉默组。(2)采用平板克隆形成实验和软琼脂集落形成实验检测鼻咽癌5-8F细胞的克隆形成能力。(3)采用裸鼠移植瘤实验分析鼻咽癌5-8F细胞的成瘤性。(4)采用Western blotting检测5-8F细胞中肿瘤干细胞相关基因的表达。结果:(1)Western blotting鉴定结果显示:与空白对照组和阴性对照组比较,沉默组鼻咽癌5-8F细胞中的NF-κBp65蛋白表达明显降低。(2)细胞平板克隆形成实验和软琼脂集落形成实验结果表明,与空白对照组和阴性对照组相比,NF-κBp65沉默细胞形成的克隆体积小、数量少。(3)各组鼻咽癌5-8F细胞分别接种于裸鼠右前肢皮下,常规饲养40 d后,NF-κBp65沉默组移植瘤重量(0.047±0.094)g明显小于阴性对照组(1.793±0.628)g和空白对照组(1.335±0.528)g,差异有统计学意义(P0.05)。(4)Western blotting检测结果显示:NF-κBp65沉默组肿瘤干细胞相关基因β-catenin、CD44、Sox2和Oct4表达明显低于空白对照组和阴性对照组。结论:(1)NF-κBp65 siRNA质粒表达载体转染鼻咽癌5-8F细胞有效降低NF-κBp65蛋白的表达。(2)NF-κBp65沉默诱导的干细胞相关基因表达下调可能是鼻咽癌5-8F细胞克隆形成抑制和致瘤性降低的分子原因。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.63

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