嗜酸性粒细胞在上下气道炎性疾病的临床及基础研究

发布时间：2020-08-09 05:47

【摘要】：第一部分嗜酸性粒细胞在慢性鼻炎患者上下气道中的临床研究第一节上下气道炎症评估方法的标准化目的:建立上下气道炎症评估方法的标准化。方法:通过与呼吸疾病国家重点实验室共同参与上下气道炎性疾病的相关课题的研究,在该课题中摸索出了上下气道炎症评估(鼻肺部一氧化氮(NO)、气道高反应性及细胞学)的方法及相应正常值。结果:鼻部NO正常值范围:400~900ppb,肺部5~25ppb;鼻激发后鼻阻力较基础值增加≥100%,支气管激发FEV1较基础值下降≥20%,判定为阳性;鼻灌洗EOS≥2.00/HP,诱导痰EOS≥2.5%为阳性。结论:上下气道炎症评估方法的标准化为上下气道的后续研究提供了相关的方法学及研究基础。第二节嗜酸性粒细胞在慢性鼻炎患者上下气道炎症相关中的意义目的:通过研究嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)在慢性鼻炎患者上下气道及全身的表达和关联,探讨预测下气道炎症的鼻部炎症指标。方法:共收集变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)患者162例,非变应性鼻炎(non-allergic rhinitis,NAR)患者117例,对照组104例(control,Ctrl)。全部研究对象均行详细病史采集、皮肤点刺实验(skin prick test,SPT)、血清总Ig E(total immunoglobin E,t Ig E)、血EOS、鼻灌洗及诱导痰EOS、鼻激发及支气管激发实验(nasal provocation test,NPT;bronchial provocation test,BPT)、鼻及呼出气一氧化氮(nasal nitric oxide,NNO;Fractional exhaled nitric oxide,Fe NO)检测(第一部分第一节所标准化后的上下气道检测方法)。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD t检验或Mann-Whitney U检验。相关性分析采用Pearson或Spearman相关参数测试法。结果:AR、NAR组较Ctrl组各炎症指标均有显著性差异(p0.01)。AR组鼻EOS、NNO、痰EOS、Fe NO、血EOS及血t Ig E较NAR组高(p0.01),而鼻阻力、NPT及BPT两组间无统计学差异。无论AR组、NAR组、还是鼻炎组(AR+NAR)鼻EOS与痰EOS、Fe NO、t Ig E及血EOS相关(p0.05),而与BPT无关。控制性别、年龄、身高及体重四个因素后,鼻EOS与痰EOS仍呈正相关(p0.01)。多元线性回归分析显示,鼻EOS、血EOS及皮肤点刺试验与痰EOS水平存在统计学关联(p0.05)。痰EOS作因变量行logistic回归分析发现鼻EOS在AR组、NAR组及鼻炎组均有意义,正确分类能力分别为77.2%、79.5%及78.1%(P0.001),而Fe NO及BPT未发现鼻部有价值指标。经ROC曲线分析鼻EOS对痰EOS阴阳判断的最佳临界值为3.30个/200HP。结论:1、AR组炎症指标较NAR组重,但都明显高于对照组;2、鼻EOS与下气道及全身多个炎症指标相关,且是痰EOS增高的相关因素。第二部分:小鼠上下气道一致的变应性气道炎症动物模型的建立目的:建立小鼠上下气道一致的变应性气道炎症(allergic airway inflammation,AAI)动物模型。方法:通过腹腔注射卵白蛋白(ovalbumin,OVA)基础致敏,滴鼻与雾化吸入OVA续贯激发,末次激发后评价小鼠模型的症状、血清特异性Ig E(specific immunoglobulin E,s Ig E)浓度及鼻肺粘膜的病理改变。结果:模型组鼻、肺部症状评分与对照组相比均有显著统计学差异(P(27)0.01)。模型组鼻、肺部黏膜破坏程度(1、2级)与对照组相比均有显著统计学差异(P(27)0.01),而3级均无统计学意义(P(29)0.05)。模型组鼻灌洗、肺灌洗及血清中OVAs Ig E浓度均较对照组明显增高(P(27)0.01)。模型组鼻、肺部EOS和杯状细胞(goblet cell,GC)均较对照组明显增高(P(27)0.01)。模型组鼻、肺EOS数目呈显著正相关(r=0.775,P(27)0.01),GC数也呈正相关(r=0.723,P(27)0.05)。结论:本造模方法能够成功建立小鼠症状学、免疫学及病理学三方面上下气道一致的AAI模型。第三部分变应性气道炎症小鼠经鼻给药后对上下气道影响及机制研究目的:利用高迁移率族族蛋白1(High-mobility group box 1 protein,HMGB1)及其受体阻滞剂晚期糖基化终产物受体(receptor of advanced glycation end products,RAGE)干预AAI小鼠,观察其治疗效果并阐述其可能机制。方法:32只BALB/c小鼠随机分为模型组(A)、HMGB1组(B)、RAGE组(C)及对照组(D)。OVA致敏的小鼠每周三次OVA滴鼻激发,持续3周。B组在滴鼻激发后1小时给予HMGB1干预。C组激发前1小时给予RAGE干预,然后A、B、C三组进行连续5天的OVA雾化吸入激发。末次激发后评估所得的鼻肺部症状、血清细胞因子(OVAs Ig E、IL4、IL10、IL17及IFN-γ)及病理改变(EOS、GC)。结果:A、B、C三组鼻部症状积分均较D组明显(P(27)0.01),C组较A、B组明显好转(P(27)0.01)。A、B、C三组肺部症状评级与D组比较均有统计学意义(P(27)0.01),C组较A、B组有统计学差异(P(27)0.01),A、B两组间比较无统计学差异(P(29)0.05)。A、B、C三组血清OVAs Ig E的浓度均显著高于对照组(P(27)0.01),A、B组亦显著高于C组(P(27)0.01),A、B两组间比较无统计学差异(P(29)0.05)。IL-4 A、B、C三组均较对照组高(P(27)0.01),C组较A、B组低(P(27)0.01),AB之间无统计学差异(P(29)0.05)。IL-10 A、B、C三组均较对照组高(P(27)0.01),C组较A、B组低(P(27)0.01),AB之间比较有统计学差异(P(27)0.05)。IL-17 A、B、C三组均较对照组高(P(27)0.01),AC、BC、AB组间比较均有显著统计学差异(P(27)0.01)。IFN-γAC、BC、AD、BD组间比较均有显著统计学差异(P(27)0.01),AB、CD组间比较无统计学差异(P(29)0.05)。IFN-γ/IL4比值A、B、C三组均较对照组低(P(27)0.01),C组较A、B组高(P(27)0.01),AB之间比较无统计学差异(P(29)0.05)。IL-17/IL-10比值A、B、C、D四组间比较均无统计学差异(P(29)0.05)。A、B、C三组鼻、肺部黏膜EOS浸润程度及1000um长GC数较对照组均有显著差异(P(27)0.01),鼻、肺部EOS及GC四个指标AC、BC组间比较均有显著性差异(P(27)0.01),而AB组比较均无统计学意义(P(29)0.05)。B组鼻、肺EOS数目呈正相关(r=0.841;p=0.009),GC数目也呈正相关(r=0.781;p=0.022);C组鼻、肺黏膜EOS也呈正相关(r=0.744;p=0.034),而C组GC无明显相关性(P(29)0.05)。结论:1.本研究证实HMGB1能够加重AAI小鼠部分炎症指标水平,而其受体阻滞剂(RAGE)能够明显降低AAI炎症水平;2.HMGB1参与调节AAI可能是通过改变Th1/Th2平衡减少组织EOS浸润得以实现;3.鼻部EOS与肺部EOS呈正相关,控制鼻部EOS的同时也控制了肺部EOS,但鼻肺部的GC相关性不如EOS。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R765.21
【图文】：

气道炎症,水平比较,箭头,指标

表 2. 三组间上下气道炎症指标水平比较AR NAR Ctrl F/ 3.70(1.20~14.23)※＃1.40(0.20~3.40)＃0.00(0.00~0.06)11.442 0.32±0.10＃0.26±0.08＃0.11±0.04 5.437 61.73(100/162)＃65.81(77/117)＃5.77(6/104) 101.440673.50(466.80~936.00)※＃455.80(248.10~705.60)＃102.50(58.00~577.73)19.440 2.97(0.00~10.63)※＃1.00(0.23~2.00)＃0.25(0.00~0.50)70.727 49.28±26.37※＃34.07±19.11＃16.57±7.07 69.449 13.58(22/162)＃10.26(12/117)＃0(0/104) 14.836 4.00(2.00~7.00)※＃2.00(1.00~5.00)＃1.80(1.08~3.00)47.453 208.01(61.70~387.50)※＃43.30(19.00~122.00)＃42.00(27.78~54.50)46.525 R 组，p〈0.01；＃与 Ctrl 组，p〈0.01

箭头,诱导痰,中性粒细胞,黑色

图 2 诱导痰细胞学涂片 HE×400白色箭头为 EOS，黑色箭头为中性粒细胞，箭头为淋巴细胞，黄色箭头为巨噬细胞，红色箭头为上皮鼻 EOS 与下气道及全身炎症指标的相关性分析与痰 EOS（r=0.448，P＜0.001）、FeNO（r=0.202，P=0.02=0.048）及血 EOS（r=0.321；P＜0.001）有统计学意义（详=0.062，P=0.270）无统计学意义。组鼻 EOS 与下气道及全身炎症指标的相关性分析与痰 EOS（r=0.442，P＜0.001）、FeNO（r=0.268， P=8，P=0.003）及血 EOS（r=0.334，P＜0.001）有统计学意 BPT（r=0.028，P=0.763）无统计学意义。鼻 EOS 与下气道及全身炎症指标的相关性分析

散点图,散点图

AR组鼻与痰EOS散点图

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