MicroRNA-222-3p与泪腺腺样囊性癌侵袭转移关系的研究
发布时间：2020-10-09 04:27
【目的】腺样囊性癌是泪腺区最常见的恶性肿瘤,在临床诊疗中我们发现该肿瘤具有易复发蔓延生长及远处转移的特性,影响治疗效果和预后,为了解决这个问题进行了很多研究,近年来研究发现microRNA参与肿瘤的发生和发展,其可以通过调控靶基因影响信号通路,对肿瘤细胞功能起抑制或促进作用。本研究的目的是通过miR-222-3p对腺样囊性癌细胞增殖、迁移、侵袭功能的影响,预测和确定miR-222-3p直接作用的靶基因,进而阐明miR-222-3p与泪腺腺样囊性癌侵袭转移关系的分子机制。【方法】利用实时定量PCR方法检测miR-222-3p在腺样囊性癌细胞ACC-2和ACC-M中的表达差异。用MTT试验、集落形成试验检测miR-222-3p对腺样囊性癌细胞系ACC-2和ACC-M活性和增殖能力的影响,用transwell迁移和侵袭实验检测miR-222-3p对ACC-2和ACC-M迁移和侵袭能力的影响,并用western blot检测了上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、Vimentin、ICAM-1的表达差异。生物信息学方法预测并筛选出miR-222-3p的候选靶基因ARNT,并用EGFP荧光报告载体实验验证miR-222-3p对ARNT的直接靶定作用,在mRNA和蛋白水平检测腺样囊性癌细胞系ACC-2和ACC-M中miR-222-3p对ARNT的影响。在腺样囊性癌细胞系中过表达或封闭靶基因ARNT后,用上述细胞表型试验检测了ARNT对细胞功能的影响,并用挽救实验验证ARNT对miR-222-3p功能上的挽救作用,EMT相关标志物检测初步探讨ARNT影响迁移和侵袭的机制。【结果】通过实时定量PCR检测,在ACC-M中miR-222-3p较ACC-2明显升高。在腺样囊性癌细胞中过表达miR-222-3p后,细胞的增殖、迁移和侵袭力增强,从而促进了肿瘤细胞的EMT过程,E-cadherin蛋白表达减少、Vimentin、ICAM-1蛋白表达增加。荧光报告载体实验结果显示miR-222-3p能够直接作用于ARNT的3'UTR区,并对其表达进行转录后调控。ARNT作为miR-222-3p的靶基因,实时定量PCR和western blot实验结果显示在腺样囊性癌细胞中过表达或封闭miR-222-3p后,ARNT的mRNA表达水平和蛋白表达水平随之降低或升高。腺样囊性癌细胞转染过表达ARNT后,细胞增殖能力降低、细胞的迁移能力降低,侵袭能力降低,抑制细胞EMT过程。挽救实验验证外源性ARNT能够部分抵消miR-222-3p对腺样囊性癌细胞功能的影响。【结论】miR-222-3p通过靶定ARNT促进腺样囊性癌细胞增殖、迁移和侵袭、促进上皮间质转化,起到了类似促癌基因的作用,在泪腺腺样囊性癌发生发展中,参与了肿瘤侵袭转移的过程,为研究和治疗泪腺腺样囊性癌开拓了新的领域和思路。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R739.7
【部分图文】：
图 1.1 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 1.2 qRT-PCR 检测 ACC-2 和 ACC-M 细胞作为内参，将 ACC-2 中 miR-222-3p 的值 值进行比对，*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0
18图 1.2 qRT-PCR 检测 ACC-2 和 ACC-M 细胞中 miR-222-3p 表达 U6 作为内参，将 ACC-2 中 miR-222-3p 的值标化为 1，ACC-22-3p 值进行比对，*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001。转染效率用脂质体将绿色荧光质粒 pcDNA3/EGFP 转染 ACC-2 和 ACC-M养 24-36h 后，将细胞置于荧光显微镜明暗场观察转染效率。实验 EGFP 的 ACC-2 细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光，明场为普通胞，两者相比 ACC-2 细胞的转染效率为 50%左右；转染 EGFP 的
图 1.3 荧光显微镜检测两种腺样囊性癌细胞的转染效率1.2.3 在腺样囊性癌细胞中转染过表达和封闭质粒有效性的验证为 了 研 究 miR-222-3p 的 功 能 ， 构 建 了 pcDNA3/pri-mpSilencer/antigomer-miR-222-3p质粒，通过酶切鉴定和测序确定了质然后对腺样囊性癌细胞 ACC-M 和 ACC-2 瞬时转染，提取细miR-222-3p 的表达水平。在两种不同的腺样囊性癌细胞中，转染 p组的细胞的 miR-222-3p 表达水平均比对照组有明显提高，ACC-M28.6 倍，ACC-2 细胞系提高 14.5 倍（图 1.4）。转染封闭质粒 antigom后，miR-222-3p 表达量显著下降。ACC-M 细胞的表达为对照组的细 胞 的 表 达 为 对 照 组 的 39% 。 说 明 构 建 的 pcDNA3/pri-mpSilencer/antigomer-miR-222-3p 质粒是有效的。
本文编号：2833226
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R739.7
【部分图文】：
图 1.1 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 1.2 qRT-PCR 检测 ACC-2 和 ACC-M 细胞作为内参，将 ACC-2 中 miR-222-3p 的值 值进行比对，*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.0
18图 1.2 qRT-PCR 检测 ACC-2 和 ACC-M 细胞中 miR-222-3p 表达 U6 作为内参，将 ACC-2 中 miR-222-3p 的值标化为 1，ACC-22-3p 值进行比对，*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001。转染效率用脂质体将绿色荧光质粒 pcDNA3/EGFP 转染 ACC-2 和 ACC-M养 24-36h 后，将细胞置于荧光显微镜明暗场观察转染效率。实验 EGFP 的 ACC-2 细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光，明场为普通胞，两者相比 ACC-2 细胞的转染效率为 50%左右；转染 EGFP 的
图 1.3 荧光显微镜检测两种腺样囊性癌细胞的转染效率1.2.3 在腺样囊性癌细胞中转染过表达和封闭质粒有效性的验证为 了 研 究 miR-222-3p 的 功 能 ， 构 建 了 pcDNA3/pri-mpSilencer/antigomer-miR-222-3p质粒，通过酶切鉴定和测序确定了质然后对腺样囊性癌细胞 ACC-M 和 ACC-2 瞬时转染，提取细miR-222-3p 的表达水平。在两种不同的腺样囊性癌细胞中，转染 p组的细胞的 miR-222-3p 表达水平均比对照组有明显提高，ACC-M28.6 倍，ACC-2 细胞系提高 14.5 倍（图 1.4）。转染封闭质粒 antigom后，miR-222-3p 表达量显著下降。ACC-M 细胞的表达为对照组的细 胞 的 表 达 为 对 照 组 的 39% 。 说 明 构 建 的 pcDNA3/pri-mpSilencer/antigomer-miR-222-3p 质粒是有效的。
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 林钊宇;李劲松;武东辉;张伟;黄洪章;潘朝斌;陈伟良;黄志权;王友元;;涎腺腺样囊性癌侵袭转移相关微小RNA的筛选[J];中华口腔医学研究杂志(电子版);2010年06期
2 周炜;姜政;;低氧诱导因子-1与消化道肿瘤的研究进展[J];世界华人消化杂志;2006年26期
本文编号：2833226
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