烟曲霉菌性角膜炎中HMGB1通过LOX-1发挥炎症放大作用

发布时间：2020-10-20 20:36

　　 目的:探讨高迁移率组box 1(HMGB1)在烟曲霉角膜炎中的炎症放大作用及LOX-1与HMGB1在角膜免疫应答中的关系。方法:1、BALB/c小鼠随机分为单纯PBS预处理组,单纯Boxb预处理组,PBS预处理+烟曲霉菌性角膜炎组,Boxb预处理+烟曲霉菌性角膜炎组。PBS或Boxb结膜下注射对小鼠角膜进行预处理,采用直接刮上皮法建立烟曲霉菌感染BALB/c小鼠真菌性角膜炎1 d,3 d,5 d模型,观察小鼠真菌性角膜炎炎症进展并记录临床评分。采用RT-PCR法检测小鼠角膜模型中LOX-1表达。2、BALB/c小鼠腹腔内注射1 ml 9%酪蛋白,24 h后给予相同刺激,再次刺激3 h后提取腹腔中性粒细胞。分别用PBS,Boxb预处理RAW264.7巨噬细胞系或腹腔提取中性粒细胞2小时后加入灭活烟曲霉菌菌丝,采用RT-PCR技术检测菌丝刺激12 h后细胞内LOX-1,Detin-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10 mRNA变化,采用western blot技术检测菌丝刺激24 h后LOX-1,IL-1β,TNFα蛋白水平变化。3、BALB/c小鼠腹腔注射3%硫代乙醇酸钠1周,提取小鼠腹腔巨噬细胞,将细胞分为正常组,烟曲霉菌刺激组,Boxb预处理+烟曲霉菌刺激组,Boxb、Poly(I)(LOX-1抑制剂)预处理+烟曲霉菌刺激组,采用RT-PCR技术检测菌丝刺激细胞12 h后检测细胞内LOX-1,TNFα,MIP-2和IL-10 mRNA变化,采用western blot技术检测菌丝刺激24 h后LOX-1,IL-1β,TNFα蛋白水平变化。结果:1、在真菌感染模型中,与PBS对照组相比,Boxb预处理组炎症表现更重,临床评分更高,LOX-1在Boxb预处理组表达显著高于PBS对照组。在单纯用PBS和Boxb预处理模型中,LOX-1表达无明显出差异。2、在烟曲霉菌菌丝刺激的RAW264.7巨噬细胞系与腹腔提取中性粒细胞中,Boxb预处理组LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达显著升高,差距有统计学意义,Detin-1表达无明显变化;无烟曲霉菌菌丝刺激的细胞中,Boxb预处理组LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达无明显变化。3、在BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中,与单纯加菌组相比,Boxb预处理组中LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达显著升高,差距有统计学意义;与Boxb预处理组相比,Boxb+Poly(I)预处理组LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达显著降低,差异有统计学意义。结论:BALB/c小鼠烟曲霉菌角膜炎中,Boxb预处理组角膜组织炎症程度加重,临床评分增加,提示HMGB1在真菌性角膜炎起促炎作用。HMGB1在真菌性角膜炎的先天免疫过程中刺激中性粒细胞和巨噬细胞LOX-1和炎症因子IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达增加,而Dectin-1表达无明显变化,提示HMGB1在烟曲霉菌角膜炎中的促炎作用与LOX-1有关而与Dectin-1无关。小鼠腹腔巨噬细胞系中Boxb促进上述因子表达升高,而Boxb与LOX-1抑制剂Poly(I)同时作用后可以下调LOX-1及炎症因子IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10的表达,进一步说明LOX-1参与HMGB1诱导的烟曲霉菌角膜炎炎症放大效应。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R772.21
【部分图文】：

图 1 各组小鼠裂隙灯照片（A-F）及临床评分（G）。感染后 1d（A）、3d（C）、5d（E）预处理组小鼠角膜临床评分照片；感染后 1d（B）、3d（D）、5d（F）小鼠角膜 Boxb 预处理评分照片。（G）对各组角膜临床评分。Boxb 预处理组可显著增加角膜炎症程度，提高炎症

小鼠裂隙灯照片（A-F）及临床评分（G）。感染后 1d（A）、3d（C）、5d（膜临床评分照片；感染后 1d（B）、3d（D）、5d（F）小鼠角膜 Boxb 预处）对各组角膜临床评分。Boxb 预处理组可显著增加角膜炎症程度，提高炎

图 3.1 RAW264.7 巨噬细胞系中 Boxb+AF 组 LOX-1（A）、IL-1β（C）、TNF-α（D）、MIP-2（E）和 IL-10（mRNA 表达均显著升高，而 Dectin-1（B）mRNA 表达无显著变化。图 3.2 RAW264.7 巨噬细胞系中 Boxb+AF 组 LOX-1（A）、IL-1β（B）、TNF-α（C）蛋白表达均显著升高
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本文编号：2849130