舌下含服免疫治疗对效应性T细胞和调节性T细胞功能的影响

发布时间：2021-12-02 15:51

　　目的·研究舌下含服免疫治疗（sublingual immunotherapy,SLIT）对变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）炎症反应中效应性T细胞（effector T cell,Teff）和调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）功能的影响。方法·选择复旦大学附属华山医院北院耳鼻咽喉头颈外科招募的20例AR患者,分别在治疗前及治疗24个月和30个月时获取其外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,检测PBMC中Teff和Treg所占CD4⁺ T细胞百分比,并检测PBMC中2种细胞钙释放激活钙通道调节分子1（calcium release-activated calcium channel modulator 1,ORAI1）蛋白的浓度和Ca²⁺平均荧光强度（mean fluorescence intensity,MFI）。然后将治疗30个月时的2种细胞进行体外培养,检测2种细胞中ORAI1蛋白的表达以及培养基中白细胞介素-4（interleuki... 

【文章来源】：上海交通大学学报(医学版). 2020,40(05)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

治疗24个月和30个月时PBMC中Teff和Treg的流式细胞检测及其占CD4+T细胞百分比的变化

ORAI1蛋白对T细胞的各种功能有着至关重要的作用[7],因此本研究分析SLIT是否能够影响T细胞亚群Teff和Treg中ORAI1蛋白的表达。ELISA检测结果显示,治疗24个月时Teff中ORAI1蛋白的表达显著少于治疗前(P=0.000),而治疗30个月时Teff中的表达又显著少于治疗24个月时(P=0.003)(图2A);但Treg中的变化情况相反,治疗24个月时Treg中ORAI1蛋白的表达显著多于治疗前(P=0.000),而治疗30个月时ORAI1蛋白的表达又显著多于治疗24个月时(P=0.007)(图2B)。ORAI1蛋白的功能是促进细胞外Ca2+的内流,从而影响细胞的各种活动[8],因此我们又对Teff和Treg中Ca2+ MFI的变化进行了分析。结果表明,Ca2+ MFI的变化与ORAI1蛋白的表达趋势基本一致,治疗24个月时Teff中Ca2+ MFI显著少于治疗前(P=0.000),而治疗30个月时Teff中Ca2+ MFI又显著少于治疗24个月时(P=0.000)(图2C);但Treg中的变化情况相反,治疗24个月时Treg中Ca2+ MFI显著多于治疗前(P=0.000),而治疗30个月时Ca2+ MFI又显著多于治疗24个月时(P=0.000)(图2D)。

为了确定lenti-ORAI1是否可以转染至Teff和Treg中,用激光扫描共聚焦显微镜进行观察,发现SLIT 30个月时的2种细胞荧光均表现为绿色,Western blotting检测显示转染后的蛋白表达条带减弱,说明成功转染了目的序列(图4)。接着对Teff和Treg中游离Ca2+的浓度进行了检测,结果发现,lenti-ORAI1转染后,Teff中Ca2+ MFI显著下降(P=0.004)(图5A),Treg中Ca2+ MFI也显著下降(P=0.000)(图5B)。此外,lenti-ORAI1转染后,Teff细胞培养基中IL-4浓度减少(P=0.009)(图5C),Treg细胞培养基中IL-10浓度也减少(P=0.000)(图5D)。图4 Lenti-ORAI1转染效率验证


本文编号：3528746