实时荧光定量PCR技术检测胆石、胆汁中的华支睾吸虫DNA

发布时间：2017-03-17 09:07

  本文关键词：实时荧光定量PCR技术检测胆石、胆汁中的华支睾吸虫DNA，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：运用基于Taqman探针法的实时荧光PCR技术检测胆囊结石患者胆汁及胆石标本中的华支睾吸虫DNA,并对其检测效价进行对比评估。 方法：随机选取2011年8-9月份30例实施内镜取石保胆手术患者的胆汁及胆囊结石,首先分别对胆汁及胆石标本进行显微镜检,然后提取其DNA。同时收集患者的相应粪便标本,进行显微镜检检测。根据华支睾吸虫细胞色素C氧化酶亚基1基因,设计合成特异性的引物、TaqMan探针,建立华支睾吸虫实时荧光PCR检测方法,并做灵敏度及特异性分析,然后对胆汁及胆石标本DNA进行基因检测。 结果：①该实验建立的实时荧光PCR检测方法对华支睾吸虫成虫DNA的最低检测阈值可达0.1pg,且不与日本血吸虫、蛔虫、广州圆线虫、弓形虫产生阳性扩增反应。②胆囊胆汁标本中有14例镜检发现虫卵(阳性率46.7%),胆汁实时荧光PCR检测结果与显微镜检结果一致(符合率100%)；胆囊结石中16例镜检发现虫卵(阳性率53.3%),19例实时荧光PCR结果阳性(阳性率63.3%)；粪便标本中9例镜检发现虫卵(阳性率30%)。 结论：①华支睾吸虫细胞色素C氧化酶亚基1基因可作为胆囊结石患者胆汁及胆石标本中华支睾吸成虫和虫卵的诊断基因。②实时荧光定量PCR技术检测胆囊结石标本中华支睾吸虫细胞色素C氧化酶亚基1基因是判定华支睾吸虫感染的有效手段。此方法快速、简便、准确性高,对取石保胆患者的术后治疗、预防复发以及提高胆囊结石合并华支睾吸虫感染的诊断方面具有重要的指导意义。
【关键词】：胆囊结石病 华支睾吸虫 实时荧光-PCR 胆汁 胆囊 结石 线粒体基因
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.62
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-15
• 第一章 材料与方法15-20
• 1.1 材料15-16
• 1.1.1 研究对象15
• 1.1.2 标本采集15
• 1.1.3 主要试剂和仪器15-16
• 1.2 方法16-20
• 1.2.1 各种临床标本的光学显微镜镜检16-17
• 1.2.2 DNA提取17-18
• 1.2.3 引物设计与合成18
• 1.2.4 实时荧光PCR反应条件及体系的建立18
• 1.2.5 灵敏度及特异性分析18-19
• 1.2.6 数据处理19-20
• 第二章 结果与结论20-27
• 2.1 结果20-26
• 2.1.1 光学显微镜检结果20-21
• 2.1.2 实时荧光PCR检测华支睾吸虫DNA的灵敏度分析21-22
• 2.1.3 实时荧光PCR检测华支睾吸虫DNA的特异性分析22-23
• 2.1.4 实时荧光PCR检测胆囊胆汁DNA结果23-24
• 2.1.5 实时荧光PCR检测胆囊结石DNA结果24-26
• 2.2 结论26-27
• 第三章 讨论27-30
• 参考文献30-35
• 综述35-55
• 参考文献48-55
• 名词缩略表55-56
• 致谢56-57
• 在校期间科研成果及发表论文57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：252658