乙肝病毒三种基因型转染细胞系在药物实验中的应用

发布时间：2017-03-18 05:01

  本文关键词：乙肝病毒三种基因型转染细胞系在药物实验中的应用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的本研究旨在建立乙肝病毒(hepatitis B virus, HBV)I基因型复制的细胞模型,以期为抗病毒治疗提供一定的实验依据。同时通过研究中国周边国家的HBV的基因型和亚型分布特点,了解相关的研究进展。方法1.构建B、C、I三种基因型1.2倍真核表达载体并转染HepG2 (Human hepatocellular liver carcinoma cell line2)细胞系。2.研究干扰素alb及四种天然化合物对HepG2细胞系和HBV表达的影响。3.从美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)数据库中收集中国周边14个国家的乙型肝炎病毒全基因组序列信息,对其中所有的B基因型序列进行分析比对。结果1.三种基因型瞬时转染HepG2细胞后均能表达HBsAg。2.干扰素alb浓度高于6000U/mL时对I1/C1重组型HBV的表面抗原有显著抑制,HepG2细胞系仅对化合物D较敏感。对于H75-B3而言,只在6小时左右加入了化合物A和D的组对病毒的活性有一定的抑制作用。对于Y17-C1,加入了化合物A、B和D的组病毒的活性有一定的抑制。3.中国周边国家乙肝病毒基因型以B、C、D三种为主,血清型则以adw2和adrq+两种为主。B3、B5、B7、B8、B9五种亚型间序列差异度4%,且它们在S区有六个共同的氨基酸特异性位点。结论本研究成功构建三种HBV基因型1.2倍真核表达载体。高浓度α1b对I1/C1重组型有抑制作用。B3、B5、B7、B8、B9五种亚型可合并为准基因亚型B3。
【关键词】：乙肝病毒 基因型 1.2倍真核表达载体 HepG2细胞系 天然化合物
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 缩略词表6-8
• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 第一部分 乙肝病毒三基因型表达载体的构建及不同化合物对其转染细胞的影响14-56
• 第一节 三种基因型真核表达载体的构建14-30
• 1 病毒株来源14
• 2 实验材料14-16
• 3 实验方法16-26
• 4 结果26-30
• 5 结果与讨论30
• 第二节 1.2倍HBV转染HepG2细胞系30-39
• 1 细胞来源30-31
• 2 实验材料31
• 3 实验方法31-37
• 4 实验结果37-38
• 5 结果与讨论38-39
• 第三节 MTS细胞生长活性实验及药物实验39-51
• 1 化合物来源40
• 2 实验材料40
• 3 实验方法40-43
• 4 实验结果43-49
• 5 结果与讨论49-51
• 第四节 稳定表达细胞系的建立51-53
• 1 实验材料51
• 2 实验方法51-52
• 3 实验结果52
• 4 结果与讨论52-53
• 参考文献53-56
• 第二部分 中国周边HBV基因型和亚型流行分布情况56-71
• 1 方法56-57
• 2 结果57-63
• 3 讨论63-66
• 参考文献66-71
• 全文总结71-73
• 本文的进步意义71
• 本文存在的问题71-73
• 综述73-79
• 参考文献76-79
• 攻读学位期间获得科研成果79
• 作者简介79-80
• 致谢80

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 李俊强;田敬华;刘峰;杜绍财;;乙型肝炎病毒表面抗原终止密码子的偏嗜性选择[J];北京大学学报(医学版);2008年03期

2 吴光华;丁惠国;曾长青;;公共核酸数据库乙肝病毒全基因组序列概况和中国HBV参照序列的建立[J];自然科学进展;2008年02期

3 杜茜;马其欢;龚旭阳;蔡雪飞;;低拷贝HBV病毒全长DNA的制备和体外复制水平的鉴定[J];重庆医科大学学报;2013年04期

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本文编号：253930