循环内皮细胞在心血管疾病中检测方法的建立与验证

发布时间：2017-10-16 04:13

  本文关键词：循环内皮细胞在心血管疾病中检测方法的建立与验证

  更多相关文章： 循环内皮细胞(CECs) 急性心肌梗塞(AMI) 血管内皮生长因子(VEGF) 流式细胞术

【摘要】：目的:循环内皮细胞(circulating endothelial cells,CECs)产生于血管损伤过程。血管损伤与多种疾病的发生息息相关,这其中包括了急性心肌梗塞(acute myocardial infarction,AMI)。因此CECs可能作为这些疾病的发生及预后标记物。本实验研究CECs在AMI病患和小鼠疾病模型的外周血中的水平,并监测其在预后中的表达状况。方法:基于标准流式细胞术的稳定,本实验组设计了多参数共同标记CECs体系,检测人体外周血中CECs的表达抗体为Hoechst33342+/CD45-/CD31+/CD146+/CD133-,检测小鼠外周血中CECs的表达抗体为Hoechst 33342+/CD45-/CD31+/KDR+/CD117-。首先,为了研究本设计体系的稳定性,本实验组构建了VEGF处理小鼠,收集其外周血,同时收集了AMI病患的外周血做组内稳定性检测。其次,为了研究此检测系统的有效性,本实验组用Real-time PCR和流式细胞术共同检测样品中CEC含量。最后,用流式检测临床的大量样本中CECs占外周血单核细胞群体的比例,这批临床样本包括61名AMI患者,45名健康成年人,以及19名治疗一个月后的AMI病患。结果:本实验做设计的基于流式细胞术的多参数共同标记CECs体系是准确可行。在AMI病患的外周血中CECs的水平确实显著高于正常健康机体外周血中CECs的含量。经过一个月的治疗,AMI病患外周血系统中CECs含量较治疗前有了明显的下降。结论:本实验设计建立的基于多抗体流式细胞术的CECs水平检测方法可针对AMI患者的诊断和预后进行更为精准的检测。
【关键词】：循环内皮细胞(CECs) 急性心肌梗塞(AMI) 血管内皮生长因子(VEGF) 流式细胞术
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 主要缩略词14-15
• 第一部分 循环内皮细胞在急性心肌梗塞疾病中检测方法的设计及其临床有效性验证15-50
• 前言15-20
• 第一章 多参数共同标记CEC体系的设计与体系变异性检测20-37
• 1.1 材料和方法20-30
• 1.1.1 主要试剂和仪器20-22
• 1.1.2 细胞培养22
• 1.1.3 VEGF小鼠模型构建22
• 1.1.4 人体外周血样本22-23
• 1.1.5 外周血样本采集23
• 1.1.6 流式细胞术检测血液样本23-26
• 1.1.7 Real-time PCR检测CECs水平26-29
• 1.1.8 实验变异性检测29
• 1.1.9 统计学分析29-30
• 1.2 结果30-35
• 1.2.1 组内检测本实验数据的稳定性30-32
• 1.2.2 Real-time PCR检测KDR基因表达对比流式细胞术检测CECs的含量32-33
• 1.2.3 时间对CECs检测含量变化的影响33-35
• 1.3 讨论35-37
• 第二章 多参数共同标记CEC体系在临床中的应用37-45
• 2.1 材料和方法37-41
• 2.1.1 主要试剂和仪器37-38
• 2.1.2 人体外周血样本38-39
• 2.1.3 外周血样本采集39
• 2.1.4 流式细胞术检测血液样本39-41
• 2.1.5 统计学分析41
• 2.2 结果41-44
• 2.2.1 检验CECs在临床AMI病患中水平表达41-43
• 2.2.2 检验CECs在临床AMI病患预后中水平表达43-44
• 2.3 讨论44-45
• 总结45-46
• 参考文献（列出全部作者）46-50
• 第二部分 叶酸受体靶标的近红外荧光探针的合成及其细胞成像性验证50-71
• 前言50-55
• 3.1 设计思路55-56
• 3.2 仪器与试剂56-57
• 3.3 目标化合物及中间体的合成57-60
• 3.3.1 化合物3的合成57
• 3.3.2 化合物5的合成57-58
• 3.3.3 化合物6的合成58
• 3.3.4 化合物7的合成58
• 3.3.5 荧光染料的合成58
• 3.3.6 目标产物FA-EDBEA-CS2的合成58-59
• 3.3.7 目标产物的光学性质检测59
• 3.3.8 细胞培养与成像59-60
• 3.4 结果与讨论60-66
• 3.4.1 荧光染料的合成60-61
• 3.4.2 化合物3的合成61-62
• 3.4.3 化合物 5、6、7 的合成62
• 3.4.4 目标产物FA-EDBEA-CS2的合成62-63
• 3.4.5 FA-EDBEA-CS2光谱性能的研究63-65
• 3.4.6 FA-EDBEA-CS2的生物成像65-66
• 3.5 讨论66-68
• 参考文献（列出全部作者）68-71
• 致谢71-72
• 附录一 共同第一作者，已接受发表的文章72-80
• 附录二 化学反应所合成的中间产物、目标产物的核磁（NMR），质谱（LMS）谱图80-83
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文83

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本文编号：1040536