ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中PCSK9与炎症因子的关系以及替格瑞洛干预的影响

发布时间：2017-10-18 23:16

  本文关键词：ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中PCSK9与炎症因子的关系以及替格瑞洛干预的影响

  更多相关文章： 前蛋白转化酶枯草溶菌素9 小分子干扰RNA 凋亡 氧化型低密度脂蛋白 人脐静脉内皮细胞 炎症因子 替格瑞洛

【摘要】：目的观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)与炎症因子表达的关系,以及替格瑞洛(Ticagrelor)干预的影响。方法用50μg/ml的ox-LDL处理HUVECs不同时间(0h,12h,24h,36h,48h),运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附剂测定(ELISA)的检测方法分别检测PCSK9、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、C反应蛋白(CRP)的mRNA和蛋白的表达,以及核因子-κB(NF-κB)核位移。应用Lipofectamine 2000转染100nmol/L的PCSK9小分子干扰RNA(PCSK9 siRNA)进入HUVECs 6h后,再加入ox-LDL 50μg/ml处理24h,以RT-PCR、ELISA的方法分别检测PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表达,以及NF-κB核位移。用50μg/ml的ox-LDL及不同浓度的Ticagrelor(40、60μmol/L)处理HUVECs 24h,以RT-PCR、ELISA的方法分别检测PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表达,以及NF-κB核位移。结果在一定时间范围内,随着ox-LDL处理HUVECs时间的不断增加,PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表达,以及NF-κB核位移逐渐增加(P0.05)。PCSK9 siRNA转染组,PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表达,以及NF-κB核位移较阴性转染组(NC)组明显降低(P0.05)。Ticagrelor能明显降低PCSK9、IL-6、MCP-1、MMP-9、CRP的mRNA和蛋白的表达,以及NF-κB核位移,呈浓度依赖性(P0.05)。结论调亡的HUVECs中存在着PCSK9基因的表达,其表达的程度及炎症因子释放的浓度与内皮细胞调亡程度有关;PCSK9 siRNA能够抑制ox-LDL诱导的HUVECs炎症因子的表达,PCSK9可能参与了炎症反应的调节;Ticagrelor能够抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡中PCSK9与炎症因子的表达,Ticagrelor的抗炎作用可能与其抑制PCSK9的机制有关。
【关键词】：前蛋白转化酶枯草溶菌素9 小分子干扰RNA 凋亡 氧化型低密度脂蛋白 人脐静脉内皮细胞 炎症因子 替格瑞洛
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、ox-LDL对人脐静脉内皮细胞PCSK9及炎症因子表达的影响13-26
• 1.1 对象和方法13-18
• 1.1.1 实验材料13
• 1.1.2 实验方法13-18
• 1.2 结果18-22
• 1.2.1 流式细胞仪分析测定细胞凋亡率18-19
• 1.2.2 ox-LDL对人脐静脉内皮细胞PCSK9 mRNA表达的影响19
• 1.2.3 ox-LDL对人脐静脉内皮细胞IL-6 mRNA和蛋白表达的影响19-20
• 1.2.4 ox-LDL对人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达的影响20
• 1.2.5 ox-LDL对人脐静脉内皮细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达的影响20-21
• 1.2.6 ox-LDL对人脐静脉内皮细胞CRP mRNA和蛋白表达的影响21
• 1.2.7 ox-LDL对人脐静脉内皮细胞NF-κB核位移的影响21-22
• 1.3 讨论22-25
• 1.4 小结25-26
• 二、PCSK9 siRNA对人脐静脉内皮细胞PCSK9及炎症因子表达的影响26-37
• 2.1 对象和方法26-31
• 2.1.1 实验材料26-27
• 2.1.2 实验方法27-31
• 2.2 结果31-34
• 2.2.1 PCSK9 siRNA对人脐静脉内皮细胞PCSK9 mRNA表达的影响31
• 2.2.2 PCSK9 siRNA对人脐静脉内皮细胞IL-6 mRNA和蛋白表达的影响31-32
• 2.2.3 PCSK9 siRNA对人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达的影响32
• 2.2.4 PCSK9 siRNA对人脐静脉内皮细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达的影32-33
• 2.2.5 PCSK9 siRNA对人脐静脉内皮细胞CRP mRNA和蛋白表达的影响33
• 2.2.6 PCSK9 siRNA对人脐静脉内皮细胞NF-κB核位移的影响33-34
• 2.3 讨论34-36
• 2.4 小结36-37
• 三、Ticagrelor对人脐静脉内皮细胞PCSK9及炎症因子表达的影响37-48
• 3.1 对象和方法37-41
• 3.1.1 实验材料37
• 3.1.2 实验方法37-41
• 3.2 结果41-45
• 3.2.1 Ticagrelor对人脐静脉内皮细胞PCSK9 mRNA表达的影响41-42
• 3.2.2 Ticagrelor对人脐静脉内皮细胞IL-6 mRNA和蛋白表达的影响42-43
• 3.2.3 Ticagrelor对人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA和蛋白表达的影响43
• 3.2.4 Ticagrelor对人脐静脉内皮细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达的影响43-44
• 3.2.5 Ticagrelor对人脐静脉内皮细胞CRP mRNA和蛋白表达的影响44
• 3.2.6 Ticagrelor对人脐静脉内皮细胞NF-κB核位移的影响44-45
• 3.3 讨论45-47
• 3.4 小结47-48
• 结论48-49
• 参考文献49-54
• 发表论文和参加科研情况说明54-55
• 综述 PCSK9在动脉粥样硬化中的作用55-63
• 综述参考文献58-63
• 致谢63

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本文编号：1057698