黄芪多糖对THP-1及HepG2细胞PCSK9表达的影响研究

发布时间：2017-10-20 15:38

  本文关键词：黄芪多糖对THP-1及HepG2细胞PCSK9表达的影响研究

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【摘要】：目的:研究黄芪多糖(APS)在THP-1及HepG2细胞内对人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)表达的影响,并初步探讨其机制。方法:体外培养THP-1单核/巨噬细胞及Hep G2肝癌细胞,CCK-8检测出APS作用的最适药物浓度。实验分两部分,第一部分,以THP-1细胞为实验对象,分组:对照(Control)组,低密度脂蛋白(LDL)组,LDL+黄芪多糖(APS)组,LDL+PPAR-β/δ激动剂(GW0742)组,LDL+PPAR-β/δ抑制剂(GSK0660)+APS组。细胞免疫荧光定位PCSK9的表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组细胞PCSK9、低密度脂蛋白受体(LDLR)、PPAR-β/δ的表达量。第二部分,以Hep G2细胞为实验对象,分组:Control组,APS组,GW0742组,APS+GSK0660组。激光共聚焦技术检测不同组细胞对Dil-LDL的吸收率,RT-PCR及Western Blot检测各组细胞PCSK9、低密度脂蛋白受体(LDLR)、PPAR-β/δ的表达量。结果:第一部分:1)CCK-8结果显示APS作用THP-1细胞的最适浓度为400ug/ml;2)RT-PCR及Western Blot结果均提示LDL组PCSK9表达较Control组增高,LDL+APS组及LDL+GW0742组较LDL组明显降低,LDL+GSK0660+APS组较LDL+APS及LDL+GW0742组表达升高(P0.05);3)对于LDLR的蛋白表达量,LDL组较Control组减弱,LDL+APS及LDL+GW0742组较LDL组升高,LDL+GSK0660+APS较LDL+APS及LDL+GW0742组明显降低(P0.05);而基因表达水平上,LDL组、LDL+APS组、LDL+GW0742组及LDL+GSK0660+APS组均较Control组降低(P0.05),其中上述前四组间LDLR基因表达无明显差异(P0.05);4)在基因及蛋白表达水平,LDL+APS及LDL+GW0742组较Control组PPAR-β/δ的表达升高,而LDL+GSK0660+APS组较LDL+APS及LDL+GW0742组又明显降低(P0.05),LDL组与Control组表达则未见明显差异(P0.05)。第二部分:1)CCK-8结果显示APS作用HepG2细胞的最适浓度为600ug/ml;2)激光共聚焦结果提示APS组及GW0742组Dil-LDL的吸收较Control增加,GSK0660组则较前两组降低;3)RT-PCR及Western Blot结果显示APS及GW0742组较Control组PCSK9表达降低,APS+GSK0660组较APS组、GW0742组PCSK9表达升高(P0.05)。4)在蛋白表达水平,APS及GW0742组较Control组LDLR的表达增加,APS+GSK0660组则较APS组、GW0742组表达降低(P0.05);基因水平上几组间表达无明显差异(P0.05)。5)基因及蛋白表达水平均提示APS组PPAR-β/δ的表达较Control组增高,APS+GSK0660组则较APS组、GW0742组表达降低(P0.05)。结论:APS可降低THP-1及GepG2细胞PCSK9的表达,从而增加LDLR的表达,且PPAR-β/δ可能是APS作用于PCSK9的通路之一。
【关键词】：黄芪多糖 前蛋白转化酶枯草溶菌素9 过氧化物酶体增殖物激活受体β 动脉粥样硬化
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-12
• 第一部分 黄芪多糖对THP-1 细胞PCSK9表达的影响研究12-28
• 1.主要试验材料及仪器12-14
• 2.实验方法14-21
• 3.实验结果21-26
• 4.讨论26-28
• 第二部分 黄芪多糖对HepG2肝癌细胞PCSK9表达的影响研究28-39
• 1.主要试验材料及仪器28-30
• 2.实验方法30-32
• 3.实验结果32-37
• 4.讨论37-39
• 全文总结39-40
• 参考文献40-43
• 文献综述43-53
• 参考文献49-53
• 致谢53-54
• 攻读硕士学位期间完成的论文54

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本文编号：1068016