AngⅡ通过AT1R降低大鼠心肌细胞中Angptl2的表达

发布时间：2017-10-29 17:27

  本文关键词：AngⅡ通过AT1R降低大鼠心肌细胞中Angptl2的表达

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【摘要】：心力衰竭是多种疾病的终末阶段,死亡率极高。随着人口老龄化进程的发展和社会压力的增加,心力衰竭的发病率逐年上升并呈现出发病年龄年轻化的趋势,给社会及家庭带来严重的经济和精神负担。而心肌肥厚作为心力衰竭发生、发展的基础,已经成为探究心力衰竭发病机制及寻找新的治疗手段的研究重点。因此,探究心肌肥厚相关发病机制,寻找新的治疗靶点是降低心力衰竭发病率和死亡率的关键。研究目的：本实验旨在探究血管紧张素Ⅱ (Angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)对大鼠心肌细胞中血管生成素样蛋白2(Angiopoietin-like protein 2, Angptl2)水平的影响。在此基础上,进一步探究AngⅡ影响Angptl2变化的可能机制。研究方法：1.选用正常Wistar大乳鼠(3天以内)30只；2.分离纯化大乳鼠心肌细胞,接种至培养板,待细胞稳定贴壁后,将细胞分为正常对照组,100nmol/LAngⅡ刺激组(0h、6h、24h、48h),24h AngⅡ刺激组(Onmol/L.50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L), AngⅡ (100nmol/L,24h) +losartan (10-4mol/L), normal+losartan (10-4mol/L), AngⅡ (100nmol/L,24h)+ PD123319 (10-4mol/L), normal+PD123319 (10-4mol/L)。3.收集各组细胞培养基；提取各组蛋白、RNA；固定24孔板各处理组细胞。4.应用细胞免疫荧光法鉴定心肌细胞；应用ELISA法检测各组培养中Angptl2的表达水平；应用细胞免疫荧光法、Western Blot技术、RT-PCR法分别在细胞、蛋白和基因水平检测各组Angptl2的表达量。实验结果：1.心肌细胞的鉴定：细胞贴壁第二天,显微镜下心肌细胞呈不规则形状、聚集成簇生长,并以一定的节律跳动,同时,视野中可见长梭形细胞,为心脏成纤维细胞；倒置荧光显微镜下观察细胞免疫荧光结果,心肌细胞胞浆中高表达肌动蛋白a (a-SMA),而心脏成纤维细胞基本不表达a-SMAo心肌细胞纯度约为94%。2. AngⅡ对Angptl2表达量的影响：通过对AngⅡ在不同浓度、不同时间条件下对Angptl2的表达量的作用的研究,确定100nmol/L AngⅡ刺激24小时时,Angptl2的表达量较对照组下降最明显(P0.05)。3.AT1R和AT2R拮抗剂的作用：在100nmol/L AngⅡ刺激24h条件下,AngII+ losartan组中Angptl2的表达量较AngⅡ组明显增加(P0.05),而normal+ losartan组和normal+PD123319组中Angptl2的表达量与正常对照组相比无明显统计学差异(P0.05); AngⅡ+PD123319组中Angptl2的表达量较AngⅡ组无明显变化(P0.05)。结论及意义：1. AngⅡ在较低浓度时可以下调心肌细胞中Angptl2的表达量。2. AngⅡ可以通过AT1R调控心肌细胞中Angptl2的表达。3. Angptl2可能在心肌肥厚的调控中发挥关键作用。
【关键词】：血管生成素样蛋白2(Angptl2) 血管紧张素Ⅱ 血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R) 心肌细胞 心肌肥厚
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R541.6
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符号说明10-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-25
• 结果25-28
• 讨论28-32
• 结论32-33
• 附图表33-41
• 参考文献41-45
• 综述45-53
• 参考文献50-53
• 致谢53-54
• 攻读硕士学位期间发表的文章54-55
• 学位论文评阅及答辩情况表55

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本文编号：1113982