饥饿对大鼠心肌自噬影响的实验研究

发布时间：2017-11-02 09:03

  本文关键词：饥饿对大鼠心肌自噬影响的实验研究

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【摘要】：目的饥饿是食物供应或摄入受到限制而使机体处于营养物质和能量摄入不足或缺乏的状态。自噬是在真核细胞内普遍存在的重要生物学现象,广泛参与多种生理病理过程,其主要作用之一是降解细胞自身物质并利用降解产物提供能量和重建细胞结构、维持细胞稳态。本研究拟探讨饥饿对大鼠心肌自噬的影响,为整体水平的自噬研究提供实验依据和参考。方法健康雄性SPF级SD大鼠105只,3月龄,体重330~370g,采用随机数字表法,分为2组:正常对照组(C组,n=15)和饥饿模型组(S组,n=90);其中,S组根据饥饿时间又随机分为六个亚组(n=15),饥饿1d组(S1亚组)、饥饿2d组(S2亚组)、饥饿3d组(S3亚组)、饥饿5d组(S5亚组)、饥饿7d组(S7亚组)和饥饿9d组(S9亚组)。饥饿期间无饲料供应,自由摄水。饥饿处理后,采用2%多聚甲醛-2.5%戊二醛磷酸盐缓冲液固定心肌组织,行透射电镜观察超微结构;采用4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定心肌组织,制作石蜡切片,行苏木素-伊红染色观察心肌组织病理学改变。采用免疫组织化学染色与Western blot法检测大鼠心肌组织LC3与Beclin 1的表达水平。结果1 HE染色观测结果:C组大鼠心肌组织形态结构正常;与C组比较,S组心肌组织呈不同程度的损伤,随着饥饿时间的延长,病理改变加重。2透射电子显微镜观测结果:C组心肌细胞超微结构正常;S组可见线粒体呈不同程度的损伤,随着饥饿时间的延长,病理改变加重,可见分隔膜与自噬体结构。3免疫组织化学染色结果:与C组比较,S组各亚组大鼠心肌组织LC3与Beclin 1表达上调,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。S组各亚组间两两比较,LC3与Beclin 1表达差异均有统计学意义(P0.05或P0.01),且在S1亚组和S2亚组,LC3与Beclin 1表达持续增高,于S2亚组达到峰值后表达逐渐下降,在S7、S9亚组,LC3与Beclin 1表达再次升高。4 Western blot检测结果:与C组比较,S组各亚组大鼠心肌组织LC3与Beclin 1表达上调,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。S组各亚组间两两比较,LC3与Beclin 1表达差异均有统计学意义(P0.05或P0.01),且在S1亚组和S2亚组,LC3与Beclin 1表达持续增高,于S2亚组达到峰值后表达逐渐下降,在S7、S9亚组,LC3与Beclin 1表达再次升高。结论饥饿状态下大鼠心肌组织LC3与Beclin 1表达上调,短期饥饿2天LC3与Beclin 1表达达到峰值,自噬增强,长期饥饿LC3与Beclin 1表达再次上调,自噬体数量增多。
【关键词】：自噬 饥饿 心肌 LC3 Beclin 1
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 饥饿对大鼠心肌自噬影响的实验研究13-43
• 1.1 材料与方法13-21
• 1.1.1 主要试剂13
• 1.1.2 主要仪器13-14
• 1.1.3 实验动物及分组14-15
• 1.1.4 动物模型制备15
• 1.1.5 大鼠一般情况观察15
• 1.1.6 标本包埋、制作切片备用15
• 1.1.7 HE染色15-16
• 1.1.8 透射电子显微镜检测16
• 1.1.9 免疫组织化学检测16-17
• 1.1.10免疫印迹检测17-21
• 1.2 结果21-32
• 1.2.1 大鼠一般情况观察结果21
• 1.2.2 HE染色结果21-24
• 1.2.3 电子显微镜检测结果24-25
• 1.2.4 免疫组化染色结果25-30
• 1.2.5 各组大鼠心肌LC3和Beclin 1 的western blot检测结果30-32
• 1.3 讨论32-40
• 1.3.1 饥饿自噬大鼠动物模型的制备32
• 1.3.2 饥饿诱导细胞自噬32
• 1.3.3 我国心脏疾病的现状32-33
• 1.3.4 自噬与心脏疾病的关系密切33-37
• 1.3.5 LC3和Beclin 1 在细胞自噬中的作用37-38
• 1.3.6 自噬的检测方法38-40
• 1.4 小结40
• 参考文献40-43
• 第2章 综述 自噬与心脏疾病43-60
• 2.1 概述43-44
• 2.2 自噬的发生发展机制44-49
• 2.2.1 自噬的起始44-45
• 2.2.2 自噬与能量平衡的维持45-46
• 2.2.3 转录因子FoxO和NAD依赖脱乙酰酶SIRT1控制的自噬46
• 2.2.4 压力信号诱导的自噬46-47
• 2.2.5 心肌细胞线粒体自噬47-48
• 2.2.6 适应不良的心肌自噬48-49
• 2.3 自噬与心脏疾病49-52
• 2.3.1 自噬在心血管疾病中的作用49
• 2.3.2 自噬与心肌疾病49-50
• 2.3.3 自噬与心肌缺血再灌注损伤50-51
• 2.3.4 自噬与心力衰竭51-52
• 参考文献52-60
• 结论60-61
• 致谢61-62
• 导师简介62-63
• 作者简介63-64
• 学位论文数据集64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 郭长江,韦京豫,杨继军,冯宇,葛玉章;不全饥饿状态下的营养干预研究[J];解放军预防医学杂志;1999年05期

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本文编号：1130847