血管平滑肌特异性SCAP转基因小鼠的建立及表型鉴定

发布时间：2017-11-06 04:13

  本文关键词：血管平滑肌特异性SCAP转基因小鼠的建立及表型鉴定

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【摘要】：目的：动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是一类主要由脂质代谢紊乱引起的心血管疾病。胆固醇调节元件结合蛋白的裂解蛋白(SREBPs cleavage activating protein, SCAP),与SREBPs形成复合物进行转运,调节LDLr和HMGCoAR的转录,并参与脂质代谢的调节。本实验通过构建血管平滑肌特异性SCAP过表达转基因小鼠来研究血管过表达SCAP对血管斑块形成和细胞胆固醇代谢的影响。方法：构建含平滑肌特异蛋白SM22启动子与SCAP443位点突变体真核表达质粒SCAP(D443N),采用原核微注射将质粒注射到卵泡内制备目标小鼠,获得编号为1-8的八只FOUNDER小鼠。运用PCR鉴定出SCAP转基因阳性小鼠。得到的转基因阳性小鼠和C57小鼠进行交配繁殖子代,通过PCR鉴定初筛,挑选出转基因阳性小鼠,阳性小鼠保留继续与C57小鼠交配五代纯化背景。从1、2、5、6、7组(3、4及8号FOUNDER小鼠死亡)中各挑选出PCR初筛为阳性小鼠进行Southern blot鉴定进一步验证外源性的完整整合,选出SCAP表达明显的组别进行下一步试验。免疫组化鉴定小鼠主动脉根部SCAP、 SREBP2、LDLr以及HMGCoAR的表达,RT-PCR检测小鼠主动脉SCAP调控的相关基因SREBP2、LDLr以及HMGCoAR等的表达。表达最强的组中选出6-8周龄雄性SCAPTg/+(转基因阳性)及SCAP+/+(转基因阴性)小鼠各12只,给予高胆固醇饮食喂养48周。油红O染色查看小鼠主动脉脂质聚集以及测量斑块大小。结果：将质粒pGL3-SM22-SCAP的片段,通过原核微注射获的了8只FOUNDER小鼠；免疫组化观察到SCAP、SREBP2、LDLr以及HMGCoAR在转基因阳性小鼠的血管表达较明显；转基因阳性小鼠主动脉RT-PCR测得靶基因SREBP2、LDLr以及HMGCoAR的表达水平较对照组明显增加。FOUNDER小鼠分别和C57小鼠进行交配繁殖至少5代后,筛选出SCAP表达最明显的2系小鼠进行下一步试验。高胆固醇饮食喂养48周后,SCAP转基因阳性小鼠动脉斑块形成比较明显,与SCAP转基因阴性小鼠对比具有统计学意义。结论：血管过表达SCAP可以增加基因SREBP2. LDLr和HMGCoAR的表达。在高脂喂养下,血管过表达SCAP明显促进脂质的聚集。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.5

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本文编号：1147291