Sirtuin 3在心肌细胞钙超载时对细胞凋亡的影响及分子机制研究

发布时间：2017-11-10 13:38

  本文关键词：Sirtuin 3在心肌细胞钙超载时对细胞凋亡的影响及分子机制研究

  更多相关文章： Sirtuin 3 心肌细胞钙超载 Cyt C caspase-3

【摘要】：目的研究外源性Sirtuin 3在H9c2心肌细胞钙超载时对细胞凋亡的影响以及可能的分子机制。方法将培养好的H9c2心肌细胞株随机分为4组：1组,对照组(control group); 2组,Sirtuin 3组(Sirtuin 3 group);3组, ionomycin组(ionomycin group); 4组, ionomycin联合Sirtuin 3组(ionomycin Sirtuin 3 group)。其中3组,4组采用ionomycin诱导法构建H9c2心肌细胞钙超载模型。采用分光光度法检测各组心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)；采用蛋白质印迹法(Western blot, WB)检测各组心肌细胞线粒体内和胞质中细胞色素C (CytC)的蛋白表达；采用Western blot检测各组心肌细胞胞质中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达；采用分光光度法检测各组心肌细胞中caspase-3的活性；采用流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI双染色法检测各组H9c2心肌细胞的凋亡比率。结果测得各组心肌细胞[Ca2+]i分别为(nmol/L)：112.31±20.12,110.28±19.83,374.82±26.29,186.45±23.14。与对照组相比,Sirtuin3组[Ca2+]i无明显改变(P0.05),ionomycin组[Ca2+]i明显增高(P0.05)；而ionomycin联合Sirtuin 3组[Ca2+]i较ionomycin组明显减少(P0.05)。提示使用ionomycin诱导法可以成功构建H9c2心肌细胞钙超载模型,而经过外源性Sirtuin 3处理心肌细胞内钙超载明显减轻。Western blot检测Cyt C的结果(1)各组心肌细胞线粒体内的Cyt C蛋白表达结果比较：与对照组相比,Sirtuin 3组无明显改变(P0.05),ionomycin组明显低于对照组(P0.05),ionomycin联合Sirtuin 3组明显高于ionomycin组(P0.05)； (2)各组心肌细胞胞质中Cyt C的蛋白表达比较：与对照组相比,Sirtuin 3组无明显改变(P0.05),ionomycin组明显高于对照组(P0.05),ionomycin联合Sirtuin 3组明显低于ionomycin组(P0.05)。Caspase-3的检测结果(1)Western blot结果显示caspase-3在胞质中的蛋白表达比较：与对照组相比,Sirtuin 3组无明显改变(P0.05),ionomycin组明显高于对照组(P0.05),ionomycin联合Sirtuin 3组caspase-3的表达明显低于ionomycin组(P0.05)； (2)分光光度法检测各组caspase-3活性分别为(nmol/h):1.231±0.13,1.128±0.19,4.825±0.21,2.253±0.23。与对照组相比,Sirtuin 3组caspase-3活性无明显改变(P0.05),ionomycin组中caspase-3活性高于对照组(P0.05), ionomycin联合Sirtuin 3组明显低于ionomycin组(P0.05)。各组心肌细胞凋亡比率(双染色结合流式细胞术)结果分别为：(29.22±0.3)%,(28.30±0.2)%,(67.24±0.5)%,(38.78±0.7)%。Sirtuin 3组的凋亡比率与对照组相比无明显差异(P0.05),ionomycin组的凋亡比率明显高于对照组(P0.05),ionomycin联合Sirtuin 3组的凋亡比率明显低于ionomycin组(P0.05)。结论在H9c2心肌细胞发生钙超载时,外源性Sirtuin 3可以减少心肌细胞发生凋亡；其可能的机制为Sirtuin 3通过减轻心肌细胞钙超载,减少线粒体内Cyt C向胞质中释放,继而减少caspase-3的激活,抑制了线粒体凋亡通路的启动。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54

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本文编号：1166906