大鼠血管平滑肌细胞表型转化前后NCX1表达变化的研究

发布时间：2017-11-13 04:11

  本文关键词：大鼠血管平滑肌细胞表型转化前后NCX1表达变化的研究

  更多相关文章： SD大鼠 血管平滑肌细胞 细胞表型 钠钙交换体1 实时荧光定量PCR

【摘要】：目的：通过培养SD大鼠的血管平滑肌细胞并对其进行诱导培养,建立血管平滑肌细胞由收缩型转为分泌型的模型,探讨两种不同功能型态下血管平滑肌细胞中NCX1的表达变化规律。方法：使用组织贴块法培养SD大鼠血管平滑肌细胞,同时在倒置显微镜下观察细胞的细胞学形态,并使用免疫组化检测细胞种类与细胞纯度。在细胞培养到第二代的时候使用诱导培养基诱导血管平滑肌细胞由收缩型转为分泌型。而后分别使用实时荧光定量PCR技术及Western blotting检测细胞在表型转化前后NCX1的mRNA及蛋白分子的表达变化规律。结果：1.经由(20%FBS+80%高糖DMEM培养基)及(10%FBS+45%高糖DMEM+45%Ham'sF 12诱导培养基)培养SD大鼠血管平滑肌细胞均成功的获得目的平滑肌细胞,倒置显微镜形态学检测发现细胞形态多样,细胞生长一定周期后呈典型的“峰谷样”排列。经诱导培养基培养的SD大鼠血管平滑肌细胞生长更加快速,形态更加多样,细胞经胰酶消化时更易悬浮。2.经特异的平滑肌α肌动蛋白免疫荧光组化染色后,荧光显微镜下可见胞质内大量发出绿色荧光、与细胞长轴平行的纤维细丝,即平滑肌α肌动蛋白丝,细胞核被染色剂染成蓝靛色居于细胞中央中,免疫组化结果证实所培养的细胞为血管平滑肌细胞。随机连续计数500个视野中的处理细胞,发现有483个细胞α肌动蛋白表达阳性,约占操作细胞数量的96%,显示所培养的血管平滑肌细胞的细胞纯度为96%,符合后续实验对细胞纯度的要求。3.使用实时荧光定量PCR技术检测发现分泌型血管平滑肌细胞中NCX1的mRNA的量明显多于收缩型血管平滑肌细胞中NCX1 mRNA的量(P0.05),高出范围约为30%。4.使用western blot技术检测发现分泌型血管平滑肌细胞中NCX1的表达分子量明显多于收缩型血管平滑肌细胞中NCX1的表达分子量(P0.05)。结论：1.使用组织贴块法能成功培养出符合纯度要求的血管平滑肌细胞。2.经诱导培养基培养后,血管平滑肌细胞由收缩型转型成了分泌型(增殖型)。3.血管平滑肌细胞在转型为分泌型后,NCX1在mRNA水平的表达量出现了明显的升高,相对于同代VSMC,其升高率约为32%,且该变化不随细胞代数的升高而转变。4.血管平滑肌细胞在转型为分泌型后其NCX1的蛋白分子表达量也出现了明显的升高,升高率约38%。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 宋秀宇,张明;鼠尾胶作为细胞贴附剂的实验评价[J];蚌埠医学院学报;2000年03期

2 陈雄林;杨耀防;熊建军;龚帧;李雪芹;石小玉;;SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养及鉴定[J];九江医学;2009年02期

3 于萍,步宏,王华,赵高平,张景丽,周桥;免疫组化结果的图像分析与人工计数方法的对比研究[J];生物医学工程学杂志;2003年02期

4 刘铭;高杨;孟令艳;;动物实验中大鼠的抓取技巧[J];医学理论与实践;2012年09期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 陆小波;低温蛋白酶的分离、纯化及其酶学性质研究[D];昆明理工大学;2007年

，

本文编号：1179030