遗传性球形红细胞增多症患者SLC4A1基因突变分析

发布时间：2017-11-19 16:28

  本文关键词：遗传性球形红细胞增多症患者SLC4A1基因突变分析

  更多相关文章： 遗传性球形红细胞增多症 带3蛋白缺陷 SLC4A1基因 基因突变 红细胞膜蛋白缺陷

【摘要】：目的遗传性球形红细胞增多症(Hereditary Spherocytosis, HS)是一种常见的遗传性溶血性疾病,以贫血、黄疸和脾肿大为特点,外周血涂片中可见球形红细胞增多。HS临床表现、分子基础和遗传方式具有显著异质性。HS发病机制是基因突变导致红细胞膜蛋白缺陷。目前己发现5种致病基因ANK1, SLC4A1, SPTA1, SPTB和EPB42,分别编码锚蛋白,带3蛋白,α-收缩蛋白,β-收缩蛋白和4.2蛋白。欧美国家对于SLC4A1基因进行突变分析,发现有错义、无义、插入、缺失等突变。虽然国内对该病的病例报道不少,但对带3蛋白SLC4A1基因进行突变检测的报道较少。对HS研究的常用方法主要是凝胶电泳对膜蛋白进行缺陷分析和DNA直接测序。然而,SDS-PAGE和Western Blot技术对膜蛋白分析的灵敏度一般。本研究利用SDS-PAGE电泳和Western Blot技术,先明确HS患者红细胞膜蛋白缺陷类型；再结合DNA直接测序技术对SLC4A1基因全部外显子和其相邻内含子进行突变分析。然后对其家系成员进行突变位点验证,以了解患者SLC4A1基因的突变形式,初步探讨中国带3蛋白缺陷的HS患者分子发病机制,进一步为患者提供遗传咨询和优生优育指导服务。方法本研究收集5个带3蛋白缺陷的HS患者及其家系成员的外周血,运用传统方法提取患者红细胞膜蛋白；利用SDS-PAGE电泳和Western Blot技术分析患者红细胞膜蛋白缺陷的类型；按照DNA试剂盒方法提取患者外周血DNA；针对缺陷带3蛋白(SLC4A1基因)设计并合成相应引物,通过PCR扩增得到目的产物。使用DNA直接测序技术对SLC4A1基因全部外显子及其相邻内含子进行突变分析,并与NCBI数据库内标准序列进行比对,分析和探讨基因突变类型。然后对其家属成员进行SLC4A1基因相关突变位点验证,以了解患者SLC4A1基因的突变形式,并初步探讨中国带3蛋白缺陷的HS患者分子发病机制。结果经SDS-PAGE和Western Blot技术分析5个家系均为带3蛋白缺陷,对带3蛋白SLC4A1基因进行DNA测序发现均有突变,结果如下：先证者1为带3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因有2个突变：第一个突变是位于4号外显子点突变c.113AC突变,Asp38→Ala38 (D38A),为错义突变； 第二个突变是SLC4A1基因6号内含子c.349+27CT(IVS6nt+27CT)。先证者2为带3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因有2个突变：第一个突变是位于13号外显子点突变C.1540CT, Cys514 →Arg514 (C514R),为错义突变；第二个突变是7号内含子c.609+86GA(IVS7nt+86GA)。先证者3为带3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因有2个突变：第一个突变是位于4号外显子点突变c.113AC, Asp38→Ala38 (D38A),为错义突变；第二个突变是位于6号内含子C.349+27CT (IVS6nt+27CT)。先证者4为带3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因4号外显子有2个突变：第一个突变是位于4号外显子点突变c.113AC, Asp38→Ala38 (D38A),为错义突变；第二个突变是位于4号外显子点突变c.166AG, Lys56→ Glu56 (K56E),为错义突变。先证者5为带3蛋白部分缺陷,SLC4A1基因4号外显子点突变c.166AG, Lys56→Glu56 (K56E),为错义突变。结论1.本研究成功运用Western Blot方法研究HS患者膜蛋白缺陷类型,Western Blot和SDS-PAGE考马斯亮蓝染色两种方法同时检测能更明确膜蛋白缺陷类型。2.HS突变位点分布散在,即使是同一蛋白缺陷,不同家系的HS患者几乎都有自己的突变类型。但同一个家系的HS患者表现为相同的突变方式。3.此研究表明,在我们所研究的中国人群中大部分HS患者以带3蛋白缺陷为主。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R556.6

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 Ricketts C.J.;Minton J.A.;Samuel J.;T.G.Barrett;郭战宏;;对硫胺素敏感的巨幼红细胞性贫血综合征:对7家族的长期随访和基因突变分析[J];世界核心医学期刊文摘(儿科学分册);2006年08期

2 黄梁浒;王志红;杨渤生;郑德柱;吴玉水;兰风华;;7个肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变分析[J];解放军医学杂志;2006年06期

3 蒋建国,李宜雄,夏昆,吕新生,夏家辉;Peutz-Jeghers综合征STK13基因突变分析[J];中华消化杂志;2004年10期

4 杨文明;李瑞娟;鲍远程;汪瀚;汪美霞;;变性高效液相色谱检测法在基因突变分析中的应用[J];中西医结合心脑血管病杂志;2008年11期

5 黄梁浒;王志红;杨渤生;郑德柱;吴玉水;兰风华;;7个肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变分析[J];福州总医院学报;2008年01期

6 阮庆国,陆春叶;基因突变分析技术综述[J];国外医学.遗传学分册;1998年05期

7 封东宁;杨勇辉;余自华;王道静;孟大川;付荣;王晶晶;;散发性激素耐药型肾病综合征患儿30例足细胞基因突变分析[J];实用儿科临床杂志;2012年05期

8 谢丰;何湘;任兆瑞;吕志宝;;儿童先天性并多指(趾)畸形HOXD13基因突变分析[J];国际骨科学杂志;2011年03期

9 吴一波,杨渤生,吴玉水,黄俏佳,兰风华;一例肾上腺脑白质营养不良患者及其家系的基因突变分析[J];上海医学检验杂志;2002年02期

10 黄梁浒,曾健,杨渤生,黄惠娟,吴玉水,兰风华;3个肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变分析[J];中华医学遗传学杂志;2004年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 兰风华;黄梁浒;杨渤生;王志红;郑德柱;吴玉水;曾健;吴一波;黄俏佳;;肾上腺脑白质营养不良患者的基因突变分析[A];第六次全国医学遗传学学术会议文摘汇编[C];2005年

2 侯艳霞;任韵清;陈建军;高敏;周伏圣;杜文辉;王培光;沈玉君;杨森;林国书;崔勇;梁燕华;袁承达;张学军;;遗传性对称性色素异常症的基因突变分析[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年

3 刘丹如;孙金峤;俞晔珩;王静漪;应文静;惠晓莹;王晓川;;7例重症联合免疫缺陷病患儿临床特征和基因突变分析[A];中华医学会第十七次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2012年

4 李福秋;金学洙;;显性遗传营养不良型大疱性表皮松解症1例报道及基因突变分析[A];2001年中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2001年

5 宋贵波;郑芳;袁玉峰;向飞艳;;2例家族性腺瘤性息肉病的基因突变分析[A];中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2012年

6 杨勇辉;余自华;黄隽;聂晓晶;王承峰;夏桂枝;陈光明;任榕娜;;中国汉族散发性孤立性激素耐药型肾病综合征女性患儿WT1基因突变分析[A];中华医学会第十七次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2012年

7 封东宁;余自华;黄隽;聂晓晶;王承峰;夏桂枝;陈光明;任榕娜;;中国南方汉族散发性激素耐药型肾病综合征儿童NPHS2基因突变分析[A];中华医学会第十七次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2012年

8 杨尧;林鹏;何玺玉;伍建;陈小春;杨晓;王春枝;;新一代测序技术同时进行染色体异常和基因突变分析[A];第十二次全国医学遗传学学术会议论文汇编[C];2014年

9 谢海花;柯龙凤;王志红;黄梁浒;兰风华;;1个有3名女性杂合子病人的X-ALD家系及其基因突变分析[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年

10 田兴亚;黄尤光;;云南少数民族G6PD缺陷的基因突变分析[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展（上册）[C];2001年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨旺;遗传性球形红细胞增多症患者SLC4A1基因突变分析[D];广西医科大学;2016年

2 王媛;2例Omenn综合症临床、免疫学特征及基因突变分析[D];重庆医科大学;2013年

3 龚梦妮;遗传性痉挛性截瘫伴胼胝体变薄一家系临床特点及基因突变分析[D];南昌大学医学院;2013年

4 王晶晶;中国南方汉族肾小球疾病儿童NPHS2和WT1基因遗传学变异分析[D];福建医科大学;2009年

5 贾海;高效毛细管电泳在基因突变分析中的方法学及应用研究[D];兰州大学;2006年

6 潘丽丽;Crigler-Najjar综合征II型UGT1A1基因突变分析[D];山西医科大学;2013年

7 李黎;自身免疫性淋巴增生综合征及DiGeorge综合征临床、免疫学特征及基因突变分析[D];重庆医科大学;2015年

8 张雯雯;GIGYF2基因突变分析[D];中南大学;2009年

9 廖林;遗传性球形红细胞增多症患者EPB42基因突变分析[D];广西医科大学;2014年

10 鹿蕾娜;中国VHL综合征家系和佩—梅病致病基因突变分析[D];中国医科大学;2009年

，

本文编号：1204213