MiR-486通过靶向HAT1调节巨噬细胞胆固醇流出

发布时间：2017-12-29 09:22

本文关键词：MiR-486通过靶向HAT1调节巨噬细胞胆固醇流出　出处：《南华大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：[目的]动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)性疾病的罹患率以及致死率现如今已经超过癌症,位居中国人群死因的第一名,严重地威胁着人类的健康。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)是一种在介导细胞内胆固醇流出的过程中发挥着重要作用的关键蛋白,该蛋白具有抗As的作用。组蛋白乙酰基转移酶1(Histone Acetyltransferase 1,HAT1)是一种能够促进组蛋白乙酰化的酶。研究显示,As的发生发展受到许多方面的因素影响,包括表观遗传学,但是核心组蛋白乙酰化对ABCA1的转录和表达,细胞内胆固醇的流出,泡沫细胞的形成及As发生发展的机理尚未阐明。本研究以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,探讨表观遗传学因素对ABCA1的转录和表达,细胞内胆固醇流出情况及其在细胞水平对As发生发展的影响。[方法]使用荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的m RNA水平,Western Blot检测ABCA1、HAT1的蛋白表达以及核心组蛋白H4第5位赖氨酸(H4K5)和第12位赖氨酸(H4K12)的乙酰化水平;通过在线生物信息学网站和荧光素酶报告基因分析预测并判断mi R-486的结合靶点;分别将mi R-486 mimics和mi R-486inhibitor转染至THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后,使用液体闪烁计数仪(Liquid Scintillation Counter)检测细胞内胆固醇流出的情况,高效液相色谱(HPLC)检测细胞内胆固醇的含量。[结果]生物信息学在线网站预测结果和荧光素酶报告基因分析提示,mi R-486直接靶向HAT1 3’UTR,下调其m RNA水平和蛋白表达;当HAT1过表达时,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中ABCA1的m RNA水平和蛋白水平均升高,同时,H4K5和H4K12乙酰化水平升高;将mi R-486 mimics转染至THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后,再过表达HAT1,ABCA1的m RNA水平和蛋白水平与过表达mi R-486时相比较没有明显的变化;液体闪烁计数仪和高效液相色谱分析结果显示,在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中,mi R-486具有抑制细胞内胆固醇流出,促进细胞内胆固醇蓄积的作用。[结论]在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中,mi R-486通过靶向HAT1,降低核心组蛋白乙酰化水平,抑制ABCA1介导的胆固醇流出。
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【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5

【参考文献】