颈动脉粥样硬化稳定斑块与不稳定斑块比较蛋白质组学研究

发布时间：2016-10-18 04:06

本文关键词：颈动脉粥样硬化稳定斑块与不稳定斑块比较蛋白质组学研究，由笔耕文化传播整理发布。

《河北医科大学》 2014年

颈动脉粥样硬化稳定斑块与不稳定斑块比较蛋白质组学研究

代雪莲

【摘要】：目的：动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是一种多种危险因素所致的进行性动脉血管疾病，病理表现复杂多样，从简单的内膜增厚到血管狭窄甚至引起致命性的冠状动脉闭塞、心肌梗死或脑梗死。颈动脉粥样硬化是缺血性脑血管病的危险因素之一，颈动脉斑块所致管腔狭窄、血流动力学改变及斑块脱落形成栓子是引起脑缺血的主要机制。比较蛋白质组学主要是应用蛋白质组学技术发现和鉴定在不同条件下蛋白质组中的差异成分,从而为揭示一定的生物学现象和规律提供依据。通过比较蛋白质组学研究，我们可以对疾病的发生和发展过程中的蛋白质调控网络有一个完整而清晰的认识，为进一步理解疾病发生发展的机制提供有力的证据。既往研究证明，动脉粥样硬化斑块不稳定性主要与炎症反应和金属蛋白酶分泌有关。但其具体病理生理机制尚不很清楚。所以，了解稳定斑块与不稳定斑块在整体蛋白表达水平上的差异是十分必要的，其结果有助于我们了解动脉粥样硬化形成的病理生理机制以及不稳定斑块发生发展的分子机制，同时为我们筛选动脉粥样硬化的血清标志物和寻找新的药物靶标提供可靠依据。本研究应用蛋白质组学技术对人体颈内动脉粥样硬化斑块进行研究，分离、鉴定差异蛋白，以期深入理解不稳定斑块形成的病理机制，为动脉粥样硬化的治疗提供新的方向。方法：1实验标本和临床资料搜集：搜集2010年3月到2012年11月在河北医科大学第二医院血管外科行血管内膜剥脱术的患者术后所得颈内动脉粥样硬化斑块。搜集患者临床资料，包括性别、年龄、既往病史、颈部血管超声结果（内膜厚度、斑块回声强度、血管狭窄率等）等。入选的病例需满足以下标准：性别相同、年龄60-70岁，，无基础疾病，颈内动脉狭窄率超过70%，近6个月有脑缺血表现。2依据美国心脏协会（AHA）制定的标准将获取的斑块分为稳定斑块组和不稳定斑块组。3提取蛋白质，FASP酶解、提取肽段、肽段脱盐，非标记(Lable-Free)定量结合LC/MS质谱技术鉴定蛋白质肽段结合数据库进行生物功能分析。4Western bolt技术对鉴定到的其中一个蛋白DJ-1的表达变化进行验证。结果： 1分组结果:根据颈动脉血管超声将所得动脉粥样硬化斑块分为2组，稳定斑块组3例，不稳定斑块组3例。 2运用蛋白质组学技术鉴定出差异表达蛋白63个，在稳定斑块中，表达下调的蛋白有25个，包括原骨胶原蛋白、C1qA亚基、胶质源性微管连接蛋白、胶原α-1（Ⅰ、Ⅵ、XXI）链、胶原α-2（Ⅰ、Ⅵ）链、胶原α-3（Ⅰ、Ⅵ）链、α2抗纤溶蛋白酶原、Z依赖性蛋白酶抑制剂、生长停滞特异性蛋白6、巯基氧化酶1、凝血因子10、人源性激肽释放酶结合蛋白、核糖核酸酶4、金属蛋白酶抑制剂3、胰岛素样生长因子结合蛋白复合体、血红蛋白亚基γ-2、羧肽酶B2、N-乙酰胞壁酸-L丙氨酸酰胺酶、PTB域吞没适配器蛋白1、溶菌酶C、巨噬细胞金属弹性蛋白酶。表达上调的蛋白有38个，包括多肽激活剂前体、40S核糖体蛋白SA、钙联结蛋白、α-parvin、水通道蛋白1、蛋白质二硫键异构酶、CD44、晶体蛋白B链、氯通道蛋白1、视黄醛脱氢酶1、NADH-细胞色素还原酶b5、凝血因子13α链、肌球蛋白轻链、半乳糖凝素、核糖核酸酶抑制剂、乙醇脱氢酶、S100A4、氨基肽酶、冠蛋白、Rab GDP分解抑制剂、14-3-3蛋白（β/α、γ、ε、η）、转醛醇酶、巨噬细胞帽蛋白、Rho GDP分解抑制剂2、S100A10、肌动蛋白相关蛋白2、原肌球蛋白α-4链、网格蛋白重链、糖苷酶、葡萄糖磷酸变位酶、网蛋白、lipoma-preferred partener、胞质非特异性二肽酶、DJ-1蛋白、PDZ-LIM域结合蛋白7。GeneCodis3分析差异蛋白的生物功能，结果显示差异表达蛋白涉及细胞凋亡、细胞粘附、蛋白酶解、老化、信号转导、血液凝固、糖代谢等方面。 3经Western blot验证，在稳定斑块中，DJ-1蛋白的表达水平高于其在不稳定斑块中的表达水平。结论： 1运用蛋白质组学技术鉴定颈动脉粥样硬化稳定斑块和不稳定斑块的差异表达蛋白涉及细胞凋亡、细胞粘附、蛋白酶解、信号转导、老化、血液凝固、糖代谢等方面，我们认为它们可能与动脉粥样硬化不稳定斑块的形成机制相关，为进一步筛选特异性功能相关蛋白和干预靶位奠定了基础。 2运用Western blot技术验证了其中差异表达的一个蛋白（DJ-1蛋白）的表达水平，为进一步研究此种蛋白参与的功能网络调控奠定基础。

【关键词】：
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R543.5
【目录】：

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