同型半胱氨酸对巨噬细胞CD147表达的影响及他汀的干预作用

发布时间：2018-02-13 00:48

  本文关键词： 同型半胱氨酸 巨噬细胞 CD147 动脉粥样硬化　出处：《南方医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是冠心病的主要病理学基础,其发病机制极其复杂,目前多数学者认同“内皮损伤学说”,即多种危险因素损伤内皮细胞,内膜通透性增高,脂质进入内膜,单核巨噬细胞渗入内膜并吞噬脂质,形成泡沫细胞;泡沫细胞不断凋亡,形成脂质核心,斑块内巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP),降解细胞外基质,导致纤维帽变薄,逐渐演变为不稳定性斑块。因此巨噬细胞在AS过程起了至关重要的作用。CD147是一种表达于人体多种组织细胞膜上的跨膜糖蛋白,可诱导MMP表达,而MMP可降解构成粥样斑块纤维帽的主要成分,从而加速斑块不稳定。同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是90年代被确定为新型的AS独立危险因素,研究证实Hcy诱导多种细胞表达MMP增多,但对其具体机制尚未完全阐明,Hcy是否通过促进MMP的上游分子CD 147表达而引起MMP分泌,参与AS发生发展过程,目前鲜有报道。他汀类药物不仅具有强大降脂作用,且能稳定及逆转动脉粥样斑块进展。有研究证实他汀能抑制斑块内CD147及MMP表达,而Hcy是动脉斑块进展的危险因素,他汀能否抑制Hcy诱导的CD147表达,目前未见报道。目的1、探讨Hcy对U-937来源巨噬细胞CD147表达的影响。2、瑞舒伐他汀干预Hcy处理的巨噬细胞,确定其对Hcy诱导CD147表达的影响。3、MTT检测Hcy、瑞舒伐他汀对U-937来源巨噬细胞活性的影响。方法1、构建巨噬细胞模型将U937细胞以5×105/L密度接种于细胞板中,加10nmol/L佛波酯(PMA)刺激48 h,显微镜下观察细胞形态,确定分化为巨噬细胞。2、Hcy、瑞舒伐他汀干预分化为巨噬细胞后,换无血清培养24 h,按如下处理:(1)分别加入浓度为0、50、100、500umol/L的Hcy孵育48h。(2)500umol/LHcy孵育0、12、24、48h。(3)0、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L 的瑞舒伐他汀和500umol/LHcy 共培养 48h。PCR、Western blot、免疫荧光检测巨噬细胞CD147的表达。3、MTT检测细胞活性将U937细胞以2×104个细胞/孔接种于96孔板中,Hcy、瑞舒伐他汀处理后,加10ulMTT溶液(5g/L),37℃孵育4h,弃上清,加100ulDMSO,震荡10min,酶标仪上测490nm处吸光度。4、统计学处理实验数据采用x±s表示,应用SPSS 21.0统计软件进行单因素方差分析,多组样本均数比较采用LSD-t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果1、未处理的U937细胞为形态均一类圆形,呈悬浮生长。PMA处理48h,可见细胞贴壁生长,为梭形、星状或不规则形。2、PCR:CD147mRNA表达量随Hcy浓度升高(或Hcy孵育时间延长)而逐渐增加,其中100、500umol/LHcy组(或24h、48hHcy组)较对照组明显增加(P0.05)。瑞舒伐他汀与500umol/LHcy共处理细胞48h后,CD147mRNA随瑞舒伐他汀浓度增加而逐渐减少,其中10-7-10-5 mol/L瑞舒伐他汀组CD147mRNA较对照组明显减少(P0.05)。3、western blot:CD147蛋白表达量随着Hcy的浓度升高(或Hcy孵育时间延长)而逐渐增加,其中,100、500umol/LHcy组(或24h、48hHcy组)与对照组相比,有统计学意义(P0.05)。不同浓度瑞舒伐他汀与500umol/LHcy共处理U-937细胞48h后,CD147蛋白表达量随瑞舒伐他汀浓度增加而逐渐减少,其中10-7-10-5mol/L瑞舒伐他汀组较对照组明显减少(P0.05)。4、免疫荧光:Oumol/LHcy处理的细胞膜上荧光浅淡,500umol/LHcy处理的荧光明显增强。而10-5mol/L瑞舒伐他汀+500umol/LHcy处理的荧光强度较500umol/L Hcy组明显减弱。5、MTT实验结果:不同浓度Hcy组、不同浓度瑞舒伐他汀组的OD值无统计学差异(P0.05)。结论本研究证实,Hcy能上调U-937来源巨噬细胞CD147的表达,而瑞舒伐他汀能抑制Hcy诱导的CD147表达;一定浓度Hcy和瑞舒伐他汀对U937细胞来源巨噬细胞的活力无明显影响。
[Abstract]:Atherosclerosis ( AS ) is the main pathological basis of coronary heart disease , and its pathogenesis is extremely complex , and most scholars agree with the theory of endothelium injury . The expression of MMP - 7 and MMP - 2 in macrophages were determined to be a new type of atherosclerosis . (3)0,10-8,10-7,10-6,10-5mol/L 鐨勭憺鑸掍紣浠栨眬鍜，

本文编号：1506950