血小板microRNA-15b调控急性冠状动脉综合征患者介入术后血小板反应性的机制研究

发布时间：2018-02-14 06:27

本文关键词：血小板凋亡血小板反应性急性冠脉综合征经皮冠脉介入治疗血小板微小 RNA microRNA-15b 血小板反应急性冠脉综合征经皮冠脉介入治疗 microRNA-15b 凋亡巨核细胞血小板　出处：《北京协和医学院》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：急性冠状动脉综合征患者介入术后血小板反应性与血小板相关microRNA差异表达背景：血小板P2Y12受体拮抗剂是急性冠脉综合征(ACS)及经皮冠状动脉介入治疗(PCI)患者的主要抗血小板药物。然而,患者对血小板P2Y12受体拮抗剂氯吡格雷的反应显示出明显的个体差异,部分患者表现为血小板高反应,易发生缺血事件；另有部分患者表现为血小板低反应,易发生出血事件,即同一种抗血小板药物产生不同的抗血小板效应称之为血小板反应多样性。目前有关血小板反应多样性发生机制主要集中在遗传学机制的研究。相关研究显示：携带CYP2C19*2功能缺失等位基因的冠心病患者与未携带者相比,显著增加了血小板高反应及血栓性事件的风险,然而CYP2C19单核苷酸多肽性(SNP)只能解释5-12%血小板反应个体差异,是否有其它遗传学因素影响血小板的反应性尚有待研究探索。近年来相关研究证实血小板中存在微小RNA (miRNAs),并可能参与调控血小板反应性及功能。目的：筛选ACS行PCI患者的血小板miRNAs表达谱,并探索有血小板高反应和低反应的患者中差异表达的血小板miRNA。方法：连续入选PCI后接受阿司匹林和氯吡格雷双联抗血小板治疗的ACS患者290例。在PCI术后第一天凌晨(12-24小时)和第二天凌晨(36-48小时)对初步入选的研究对象进行两次VerifyNow血小板功能检测,将P2Y12反应单位(PRU)≥300的患者纳入血小板高反应(HPR)组,将PRU170的患者纳入血小板低反应(LPR)组。制备患者的去白细胞血小板,利用人miRNA表达谱芯片检测4名有血小板低反应和4名有血小板高反应的PCI术后患者血小板的miRNA表达谱。对其余17名血小板低反应组的患者和22名血小板高反应组的患者进行逆转录-定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证芯片检测结果。结果：研究初步入选了290例ACS行PCI患者,根据血小板功能检测的结果,21例PRU170患者纳入血小板低反应组(LPR),26例PRU≥300的患者纳入血小板高反应组(HPR)。在入组患者的血小板中共阳性检出420种miRNA。其中,miR-145和miR-15b在有血小板低反应和高反应的患者中差异表达(P0.05)。利用RT-PCR检测17例有血小板低反应和22例有血小板高反应的患者血小板中miR-145和miR-15b的表达量。血小板低反应者,其血小板miR-15b的表达量显著高于血小板高反应者(P=0.020)。将危险因素校正后,血小板miR-15b的表达量是血小板低反应的独立危险因素(比值比,118.10；95%置信区间(3.40,4102.96))。结论：(1)在急性冠脉综合征经皮冠脉介入治疗的患者中,血小板表达的miRNA有420种；(2)血小板miR-15b的表达量与血小板反应呈负相关,即表现为血小板高反应性组miR-15b表达量明显降低,而在血小板低反应性组miR-15b表达量则明显增加；(3) miR-15b可能参与调控血小板功能。microRNA-15b作用于靶基因Bcl-2而促进巨核细胞凋亡背景：在急性冠脉综合征(ACS)经皮冠脉介入治疗(PCI)的患者中,血小板miR-15b在血小板低反应者的表达量显著高于血小板高反应者。既往的研究证实Bcl-2是miR-15b的靶基因,miR-15b能够通过抑制Bcl-2蛋白表达而促进肿瘤细胞凋亡。然而,miR-15b在血小板中的功能尚不清楚。血小板miRNA的功能研究多在巨核细胞系--人成巨核细胞白血病细胞MEG-01中进行。目的：观察转染miR-15b模拟物或抑制剂后MEG-01细胞的凋亡比例和细胞中Bcl-2和procaspase-3蛋白的表达水平。方法：利用RNAiMAX转染试剂将miR-15b模拟物或抑制剂转染入MEG-01细胞中,培养36小时后收集细胞做western blot检测蛋白表达水平或流式细胞术检测细胞凋亡。结果：在MEG-01细胞中,转染miR-15b模拟物导致Bcl-2蛋白表达量减少24%,转染miR-15b抑制剂导致Bcl-2蛋白表达量增加80%(P=0.018；P=0.019)。另外,转染miR-15b模拟物导致procaspase-3蛋白表达量减少42%,而转染miR-15b抑制剂导致Bcl-2蛋白表达量增加30%(P=0.006；P=0.021)。转染miR-15b模拟物能够促进MEG-01细胞中膜联蛋白(Annexin Ⅴ)和碘化丙啶(PI)染色的凋亡事件增加130%,线粒体膜电位(△Ψm)去极化的细胞增加120%。结论：miR-15b通过作用于靶基因Bcl-2而促进巨核细胞凋亡,提示miR-15b可能在血小板中有促凋亡的生物学功能。急性冠状动脉综合征患者介入术后血小板凋亡率与血小板反应性的关联研究背景：在急性冠脉综合征(ACS)经皮冠脉介入治疗(PCI)的患者中,血小板miR-15b在血小板低反应者的表达量显著高于血小板高反应者。miR-15b通过作用于靶基因Bcl-2而促进巨核细胞凋亡,提示miR-15b可能在血小板中有促凋亡的生物学功能。然而,ACS行PCI患者的血小板凋亡率与血小板反应性之间的关联尚不清楚。目的：探讨ACS行PCI患者的血小板凋亡率与血小板反应性之间的关联。方法：连续入选PCI后接受阿司匹林和氯吡格雷双联抗血小板治疗的ACS患者51例。在PCI后进行VerifyNow血小板功能检测和流式细胞术检测血小板凋亡率。利用ABT-737--一种类BH3抑制剂在体外诱导患者血小板凋亡,随后采用光学比浊法检测诱导凋亡后血小板的聚集率。制备患者的去白细胞血小板,用western blot检测蛋白表达水平。结果：在入选的51例ACS行PCI的患者中,血小板凋亡率与血小板反应性呈负相关(r=-0.643,P0.001)。线性回归分析显示,血小板凋亡率与血小板反应性呈独立负相关(标准化回归系数β=-0.643,P0.001)。ROC曲线分析显示,血小板凋亡率≤6.64%是预测PCI术后ACS患者血小板反应_240的最佳值,灵敏度70.8%,特异度65.0%。ROC曲线下面积为0.715(95%置信区间(0.564,0.866),P=0.015)。ACS行PCI患者的富血小板血浆与ABT-737 (2.5μM,5μM和10gM)在37℃孵育2小时后,流式检测血小板凋亡率分别达到了11.4%,19.9%和46.8%(P0.001)。ABT-737体外干预使ACS患者PCI后的血小板聚集率随浓度梯度下降(42.4%,38.5%和29.6%,P0.001)。另外,有血小板高反应的ACS行PCI患者血小板中Bcl-2和procaspase-3蛋白的表达量较血小板低反应者分别高出130%和60%(P=0.003,P=0.003)。结论：在急性冠脉综合征经皮冠脉介入治疗的患者中,血小板凋亡率与血小板反应性呈负相关。体外诱导患者血小板凋亡将降低患者血小板反应性。血小板miR-15b通过促进凋亡而负性调控患者的血小板反应性。血小板凋亡可能为PCI术后克服患者血小板高反应性提供新的抗血小板治疗靶点。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.4

【共引文献】