丹参酮ⅡA抑制弹力蛋白酶诱导的腹主动脉瘤扩张及其机制的研究

发布时间：2018-02-28 16:54

  本文关键词： 腹主动脉瘤 丹参酮ⅡA 基质金属蛋白酶 促炎因子 氧化应激 Toll样受体 髓样分化因子88 核因子κB　出处：《南京大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分 弹力蛋白酶诱导大鼠腹主动脉瘤模型的建立与改进目的：建立符合要求的腹主动脉瘤动物模型从而给本研究建立基础。方法：首先按文献报道建立弹力蛋白酶诱导的大鼠腹主动脉瘤模型。用50只S-D大鼠,随机分成5组,分别接受生理盐水及弹力蛋白酶(0.1U/μL、1U/μL、10U/μL、 100U/μL)灌注30分钟造模,B超监测腹主动脉内径变化并于造模术后28天取标本,明确最适造模浓度。再用30只S-D大鼠,随机分成3组,以最适浓度灌注不同时间(1min,10min,30min),B超监测腹主动脉内径变化并于造模术后28天取标本,明确最适造模浓度。结果：在成功建立大鼠腹主动脉瘤基础上,得出改进后生理盐水组存活率为100%,其余各组均为90%,生理盐水及0.1U/μL弹力蛋白酶灌注组的成瘤率为0,而1U/μL、10 U/μL、100 U/μL灌注组成瘤率为100%,在建立腹主动脉成功组中,灌注浓度与腹主动脉扩张程度无关(P=0.136及P=0.261)。在以1 U/μL弹力蛋白酶灌注时,30min组存活率为90%,其余两组存活率为100%,1min组成瘤率为70%,10mmin与30min组为100%,灌注时间越长,腹主动脉扩张越明显(P=0.000及P=0.007)。结论：本研究以1U/μL浓度的弹力蛋白酶灌注大鼠腹主动脉10min建立腹主动脉瘤动物模型技术上是可行的,同时可提高存活率和减少不必要的浪费,可为后续实验提供稳定高效平台。第二部分 丹参酮ⅡA对大鼠腹主动脉瘤的干预和效果目的：研究丹参酮ⅡA对实验性大鼠腹主动脉瘤的抑制作用。方法：SD雄性大鼠36只随机平均分成实验组、对照组、空白组。实验组与对照组予胰弹力蛋白酶灌注肾下段腹主动脉,空白组予生理盐水灌注。实验组自造模前1天起全程腹腔内注射2mg/d (10ml)丹参酮ⅡA,对照组与空白组予等量生理盐水腹腔内注射。术前7天和术后第7、14、21、28 d使用多普勒超声测量动脉瘤最大处内径并测量动脉收缩压。术后28 d取腹主动脉观察组织学变化并通过免疫组化、ELISA法、Western blot法、RT-PCR方法进行分析。结果：术后28 d实验组腹主动脉瘤直径较对照组明显减小(TanⅡA vs control, 0.23±0.023 vs 0.31±0.038, t=5.62, p0.001),但各组血压手术前后无明显变化(p值分别为0.226,0.287,0.304)。实验组标本弹性纤维含量明显高于对照组(Tan ⅡA vs control,14.6±3.3 vs 7.6±2.6, t=5.09, p0.001),管壁结构较完整保存。实验组基质金属蛋白酶(MMP)-2与MMP-9在mRNA转录(TanⅡA vs control, MMP-2,1.52±0.44 vs 2.14±0.54 t=2.76,p=0.007; MMP-9,1.35±0.44 vs 2.76±0.77, t=5.48,P=0.001)和蛋白质表达水平上均较对照组明显下降(TanⅡA vs control, MMP-2,1.85±0.27 vs 3.61±0.31, t=13.18, p 0.001; MMP-9,2.28±0.23 vs 3.84±0.28, t=13.30, p0.001), TIMP-1与TIMP-2在转录水平得到明显提升(TanⅡA vscontrol, TIMP-1,0.93±0.26 vs 0.48±0.18, t=4.34, p0.001; TIMP-2,3.11±0.58 vs 0.41±0.17,t=13.42,p0.001),同时单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、8-羟化鸟苷酸(8-OHdG)、8-异前列腺素(8-isoprostane)表达则明显较对照组明显减少(Tan ⅡA vs control, MCP-1, 0.68±2.45 vs 0.39±1.55, t=9.67,p0.001; IL-6,48.3±9.7 vs 144.2±13.9, t=17.59, p0.001; iNOS,0.52±3.24 vs 1.22±4.37,t=12.19,p0.001; 8-OHdG,1.60±0.21 vs 2.46±0.27, t=7.83, p0.001; 8-isoprostane, Tan ⅡA vs Control,13.38±3.27 vs 28.84±5.53,t=7.51, p0.001;), IL-1β和TNF-α的mRNA水平得到显著提升(Tan Ⅱ Avs control, IL-1β,0.73±0.19 vs 1.35±0.22, t=6.59, p0.001; TNF-α,0.68±0.19 vs 2.07±0.36, t=10.69,p0.001)。结论：从大体结果中得出丹参酮ⅡA可以显著抑制腹主动脉瘤的扩张,从细胞水平可见丹参酮ⅡA保护血管平滑肌细胞,从分子水平上表明丹参酮ⅡA可以抑制MMP-2和MMP-9的表达,抑制TIMP-1和TIMP-2的转录水平,减弱MCP-1和IL-6的表达,降低IL-1β和TNF-α的转录,弱化炎症反应,减少iNOS的合成,减轻氧化应激损伤,导致8-isoprostane和8-OHdG生成减少。第三部分丹参酮ⅡA与MyD88依赖性TLR-4通路在抑制腹主动脉瘤中的关系目的：探索丹参酮ⅡA与是否对髓样分化因子88(MyD88)依赖性Toll样受体(TLR)-4通路抑制实现抑制实验性大鼠腹主动脉瘤扩张。方法：雄性SD大鼠(每组12只)随机分为三组：Tan ⅡA组、对照组和空白组。Tan IIA组和对照组经主动脉内灌注弹性蛋白酶诱导腹主动脉瘤,假手术组灌注生理盐水。Tan IIA组大鼠给予Tan IIA(2mg/只/天)。灌注后24d,采集腹主动脉样本,使用RT-PCR, Western blot、免疫组化和免疫荧光方法进行评价。结果：取标本后的多种检测方法共同表明丹参酮ⅡA干预使得在对照组出现高强度强烈表达的TLR-4、MyD88、磷酸化核因子KB(pNF-KB)和磷酸化IκBα(pIκBα)在实验组中表达显著减少(TLR-4,0.82316±0.22vs 1.14120±0.29, t=-2.62,p=0.017; MyD88,0.63919±0.26 vs 0.99909±0.22, t=-3.17, p=0.006; pNF-∈B,1.51225±0.40 vs 2.92694±0.49, t=-6.71, p0.001; pIicBa,1.07369±0.16 vs 1.31090±0.18, t=-2.95, p=0.008)。结论：MyDS8依赖性TLR-4信号通路激活NF-∈B导致多种致病蛋白高表达,在腹主动脉瘤病理过程中起到重要作用,丹参酮ⅡA抑制这条通路,显著降低通路蛋白表达,最终实现抑制腹主动脉瘤扩张的效果。
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【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.16

【参考文献】

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