AngⅡ抑制BKca通道在心肌纤维化中的作用机制研究

发布时间：2018-03-26 03:41

  本文选题：心肌纤维化　切入点：血管紧张素II　出处：《西南医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:成纤维细胞的增殖及向肌成纤维细胞分化是心肌纤维化的病理基础。AngII是RAAS中最具效应的因子,可促进心肌纤维化进程。新近研究发现人心房成纤维细胞上存在大量的BKca通道,其与成纤维细胞的增殖有一定的相关性。因此,本研究拟采用体外培养人心房成纤维细胞、全细胞膜片钳技术及基因编辑等方法,探讨BKca通道在Ang II诱导心肌纤维化过程中的作用。方法:本实验采用组织块贴壁法体外培养人心房成纤维细胞传至第二代并分为三组:对照组,不做任何处理;Ang II组,500 nmol/L Ang II干预细胞;过表达BKcaα亚基组,脂质体转染重组质粒(CMV/KC NMA1/IRES/acGFP1)至细胞。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测干预前后纤维化标记物(α-SMA,Collagen I,Collagen)和BKcaα及β亚基的mRNA和蛋白质表达水平,全细胞膜片钳技术(Whole-cell patch clamp technique)记录Ang II作用前后的BKca电流的变化。电流变化观察指标:1)人心房成纤维细胞细胞上BKca通道电流的基本特点;2)AngII对成纤维细胞上BKca通道电流的作用。结果:1)Ang II上调人心房成纤维细胞上α-SMA,Collagen I,Collagen III的mRNA和蛋白质表达。?与对照组相比,500 nmol/L Ang II作用成纤维细胞24h后,明显上调成纤维细胞上α-SMA(0.893±0.058 vs 0.282±0.072,P=0.004)、Collagen I(0.858±0.060 vs 0.306±0.058,P=0.018)、Collagen III(0.946±0.054 vs 0.447±0.041,P=0.030)的mRNA表达,差异具有统计学意义。?与对照组相比,500nmol/langii刺激成纤维细胞24h后,明显上调成纤维细胞上α-sma(0.967±0.038vs0.732±0.037,p=0.020)、collageni(0.857±0.010vs0.505±0.010,p=0.020)、collageniii(0.975±0.030vs0.626±0.010,p=0.009)的蛋白质表达水平,差异具有统计学意义。2)angii可明显下调成纤维细胞上bkcaα及β亚基mrna和蛋白质表达水平。?与对照组相比,500nmol/langii作用成纤维细胞24h后,明显下调bkcaα亚基(9.930±0.952vs0.709±0.223,p=0.001)及bkcaβ亚基(5.039±0.268vs1.390±0.640,p=0.020)的mrna表达水平。?与对照组相比,500nmol/langii作用于人心房成纤维细胞上72h后,明显下调bkcaα(0.781±0.0728vs1.232±0.043,p=0.006)及bkcaβ(0.872±0.0530vs1.333±0.502,p=0.001)的蛋白表达水平。3)人心房成纤维细胞上bkca通道电流的特性:?该通道具有内向整流性及电压依赖性,可被ibtx特异性阻断;?angii预处理24小时后可明显抑制成纤维细胞上bkca的宏观电流幅度,在+60mv电压时,bkca电流密度从31.054±2.900下降到13.508±3.000。4)过表达bkcaα亚基(cmv/kcnma1/ires/acgfp1)对成纤维细胞上α-sma,collageni,collageniii的mrna和蛋白质表达的影响。?与对照组相比,过表达bkca后可明显下调α-sma(0.524±0.097vs1.219±0.150,p=0.007)、collageni(0.482±0.084vs1.023±0.134,p=0.020)、collageniii(0.664±0.010vs1.081±0.138,p=0.036)的mrna表达水平,差异具有统计学意义。?与对照组相比,过表达bkca后可明显下调α-sma(0.391±0.015vs0.732±0.037,p=0.001)、collagen(0.227±0.010vs0.505±0.010,p=0.001)、collageniii(0.156±0.040vs0.626±0.010,p=0.008)的蛋白质表达水平,差异具有统计学意义。结论:本研究从体外培养细胞水平证实:1)Ang II可诱导心肌纤维化。2)Ang II可抑制人心房成纤维细胞上BKca的mRNA和蛋白质表达及电流强度。3)过表达BKca可明显下调纤维化指标的表达。4)Ang II通过抑制BKca通道的活性从而促进心肌纤维化进程,其机制可能是Ang II抑制了成纤维细胞上BKca的电流。提示BKca通道可能是预防或治疗心肌纤维化的潜在靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R54

【参考文献】

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