丹参素对压力负荷后小鼠心室重构的影响及机制研究

发布时间：2018-04-03 08:12

  本文选题：主动缩窄术　切入点：心室重构　出处：《武汉大学》2016年博士论文

【摘要】：心室重构是心力衰竭发展的基础。如何控制、延缓和逆转心室重构,是治疗心力衰竭的关键。丹参素(DSS)是一种水溶性酚性芳香酸类化合物,主要来源于唇形植物丹参和甘西鼠尾草的根。丹参素是一种天然活性产物且具有清除氧自由基、降解过氧化物及抗氧化特性,其抗氧化活性强于维生素C。研究报道丹参素通过其抗氧化特性和心脏保护效应抑制异丙肾上腺素诱导的心室肥厚,显著降低心脏重量／体重比(HW/BW)和左心室重量/体重比(LVW/BW)。这些研究结果均提示丹参素具有心脏保护作用。但是,丹参素对压力负荷后心室重构的影响尚未见报道。本研究通过主动脉缩窄术(TAC)构建心室重构模型,观察丹参素对压力负荷后心功能及心室重构的影响,并探讨其机制。第一部分丹参素对压力负荷后小鼠心功能及心室重构的影响目的：探讨丹参素对压力负荷后小鼠心功能及心室重构的影响。方法：将C57BL/6雄性小鼠随机分成Sham-Saline组、Sham-DSS组、PAC-Saline组和TAC-DSS组,通过主动脉缩窄术制备小鼠心室重构模型,术后根据分组给予不同处理8周。心脏超声检测心脏结构和心脏功能;心脏超声后处死小鼠,留取心脏组织标本。观察各组小鼠心率(HR)、体重(BW)、肺脏重量/体重比(LW/BW)、心脏重量/体重比(HW/BW)和心脏重量/胫骨长度比(HW/TL);RT-PCR检测ANP(心房钠尿肽)、BNP(B型利钠肽)、β-MHC(β-肌球蛋白重链)和α-MHC(α-肌球蛋白重链)的表达；HE染色观察各组小鼠心脏体积和心肌细胞横截面积。结果：(1)各组小鼠HR和BW之间差异无统计学意义(p0.05)；(2)TAC-Saline组小鼠LW/BW、HW/BW和HW/TL均高于Sham-Saline组(p0.05),而TAC-DSS组较TAC-Saline组降低(p0.05);(3)与Sham-Saline组相比,TAC-Saline组的心功能减退和心室腔增大(p0.05),AC-DSS组心脏超声指标优于TAC-Saline组(p0.05);(4)RT-PCR结果发现,相比Sham-Saline组,TAC-Saline组ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达增加(p0.05)和α-MHC mRNA的表达降低(p0.05)；而TAC-DSS组较TAC-Saline组ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达降低(p0.05)和α-MHC mRNA的表达升高(p0.05)；(5)HE染色显示主动脉缩窄术后心脏体积和心肌细胞横截面积增大,而丹参素能够降低主动脉缩窄术引起的心脏体积和心肌细胞横截面积的增大。结论：丹参素干预可改善压力负荷后小鼠的心功能和心室重构。第二部分丹参素对压力负荷后小鼠心室重构时氧化应激、心肌细胞凋亡和心肌纤维化的影响及作用机制的研究目的：探讨丹参素对压力负荷后小鼠心室重构时氧化应激、心肌细胞凋亡和心肌纤维化的影响及作用机制的研究。方法：将C57BL/6雄性小鼠随机分成Sham-Saline组、Sham-DSS组、TAC-Saline组和TAC-DSS组,通过主动脉缩窄术制备小鼠心室重构模型,术后根据分组给予不同处理8周。心脏超声后处死小鼠,留取心脏组织标本。(1)TUNEL染色检测各组小鼠心肌细胞凋亡情况和DCFH-DA检测心肌细胞内ROS水平,Western blot检测Caspase-3、Bax和Bcl-2凋亡相关蛋白表达；(2)Western blot检测Nrf2、HO-1、NQO-1和y-GCS的蛋白表达；(3)RT-PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达；(4)Western blot检测TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达；(5)Masson染色检测心肌纤维化程度。结果：(1)TUNEL染色发现,与Sham-Saline组相比,TAC-Saline组心肌细胞凋亡增加(p0.05),TAC-DSS组心肌细胞凋亡低于TAC-Saline组(p0.05)；与Sham-Saline组相比,TAC-Saline组心肌组织中的ROS水平升高(p0.05),而TAC-DSS组心肌组织中的ROS水平低于TAC-Saline组(p0.05)：与Sham-Saline组相比,TAC-Saline组Bax和Caspase-3蛋白表达升高(p0.05),而TAC-DSS组较TAC-Saline组的Caspase-3和Bax蛋白表达减少(p0.05),各组Bcl-2蛋白表达之间无差异;(2)与Sham-Saline组相比,TAC-Saline组Nrf2和HO-1蛋白表达升高(p0.05),NQO-1和γ-GCS蛋白表达下降(p0.05),而TAC-DSS组Nrf2、HO-1、NQO-1和y-GCS蛋白表达均高于TAC-Saline组(p0.05);(3)与Sham-Saline组相比,TAC-Saline组TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达升高(p0.05),而TAC-DSS组TGF-β1、 CTGF、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达低于TAC-Saline组(p0.05);(4)与Sham-Saline组比较,TAC-Saline组Smad2和Smad3磷酸化水平升高(p0.05)、TGF-β1蛋白表达增加(p0.05)和Smad7蛋白表达下降(p0.05)；而TAC-DSS组较TAC-Saline组的Smad2和Smad3磷酸化水平降低(p0.05)、TGF-β1蛋白表达减少(p0.05)和Smad7蛋白表达升高(p0.05)；(5)Masson染色提示主动脉缩窄术后心肌纤维化程度增加,而丹参素能够降低主动脉缩窄术所致的心肌纤维化。结论：丹参素可降低压力负荷引起的心肌细胞凋亡、氧化应激和心肌纤维化。
[Abstract]:The effects of danshensu on cardiac function and ventricular remodeling in mice after pressure loading were studied . The effects of danshensu on cardiac function and ventricular remodeling in rats after pressure loading were studied .
Results : ( 1 ) There was no significant difference between HR and BW ( p < 0.05 ) .
( 4 ) Compared with Sham - Saline group , the expression of ANP , BNP , 尾 - MHC mRNA in TAC - Saline group was increased ( p . 05 ) and the expression of 伪 - MHC mRNA decreased ( p . 05 ) .
Compared with TAC - Saline group , the expression of ANP , BNP , 尾 - MHC mRNA and the expression of 伪 - MHC mRNA in TAC - DSS group increased ( p < 0.05 ) .
Objective : To study the effects of danshensu on myocardial cell apoptosis and myocardial fibrosis in mice after pressure loading .
( 2 ) Western blot was used to detect protein expression of Nrf2 , HO - 1 , NQO - 1 and y - GCS ;
( 3 ) RT - PCR was used to detect the expression of connective tissue growth factor ( ctgf ) , transforming growth factor - beta1 ( TGF - 尾1 ) , type 鈪，

本文编号：1704344