人源PPARγ过表达细胞株的构建及其功能的研究
本文选题：动脉粥样硬化 + 慢病毒 ； 参考：《吉林大学》2016年硕士论文
【摘要】：目的:为了研究PPARγ在动脉粥样硬化发病过程中的作用,本文中建立特异性PPARγ高表达细胞模型,用于研究PPARγ与相关配体的相互作用及其在动脉粥样硬化过程中所参与的细胞信号通路和泡沫细胞形成的机制。首先根据人类cDNA文库中PPARγ的基因序列设计引物,采用RT-PCR技术以巨噬细胞总RNA为模板扩增得到PPARγ完整编码区序列,将其克隆至慢病毒过表达载体中,通过脂质体共转染技术将慢病毒包装载体与过表达载体共转染至293T细胞中,之后包装成慢病毒侵染293T细胞,构建得到稳转型过表达细胞株,最后采用western-blot及双荧光素酶报告基因鉴定PPARγ的表达及活性。通过以上的实验操作成功重组质粒,并经测序证实克隆的PPARγ序列完整,插入方向正确,病毒侵染后293T细胞PPARγ蛋白大量表达,双荧光素酶报告基因检测发现在特异性配体作用下过表达的PPARγ能够很好地启动下游启动子元件,由此证明成功建立了高表达PPARγ的细胞株,并最终获得了相应的蛋白及生物学功能,为进一步研究PPARγ的相关功能及其激活剂和抑制剂提供有利的细胞模型工具。
[Abstract]:Objective: to study the role of PPAR 纬 in the pathogenesis of atherosclerosis, a specific cell model of high expression of PPAR 纬 was established in this paper. To study the interaction of PPAR 纬 with related ligands, the cellular signaling pathway involved in atherosclerosis and the mechanism of foam cell formation. Firstly, primers were designed according to the gene sequence of PPAR 纬 in human cDNA library. The complete encoding region of PPAR 纬 was amplified by RT-PCR using macrophage total RNA as template, and cloned into lentivirus overexpression vector. The lentivirus packaging vector and over-expression vector were co-transfected into 293T cells by liposome co-transfection, and then they were packaged as lentivirus to infect 293T cells. Finally, western-blot and double luciferase reporter genes were used to identify the expression and activity of PPAR 纬. The recombinant plasmid was successfully constructed and sequenced, and the cloned PPAR 纬 sequence was confirmed to be complete and inserted in the correct direction. The PPAR 纬 protein was expressed in 293T cells after infection. The detection of double luciferase reporter gene showed that overexpression of PPAR 纬 under specific ligand could well activate downstream promoter element, which proved that the cell line with high expression of PPAR 纬 was successfully established. Finally, the corresponding protein and biological functions were obtained, which provided a useful cell model tool for the further study of the related functions of PPAR 纬 and its activators and inhibitors.
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5
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，本文编号：1805097
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