醛固酮瘤术后持续性高血压患者临床特点及差异表达基因研究

发布时间：2018-04-27 19:25

本文选题：醛固酮瘤 + 高血压　；参考：《中国人民解放军医学院》2015年博士论文

【摘要】：背景原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism, PA),简称原醛症,是一种常见的、可治愈的继发性高血压的原因之一,主要是以肾上腺皮质自主分泌过多醛固酮为特征,部分患者伴有低钾血症,其病因主要是特发性醛固酮增多症(idiopathic hyperaldosteronism, IHA)和醛固酮瘤(aldosterone-producing adenoma,APA),约占原醛症的90%。据估计,原醛患者约占所有高血压患者的6%-12%,占难治性高血压患者的20%。既往研究发现,原醛患者经单侧肾上腺切除后约30%-72%的患者术后高血压可恢复正常,然而,目前有关APA术后持续性高血压的发病机制尚不清楚。随着人类基因组计划的完成,高通量的基因芯片技术迅速发展。基因芯片技术,又被称为cDNA微阵列(cDNAmicroarray),主要采用微阵列的方式,把许多高密度寡核苷酸、基因片段固定在硅片、玻片和尼龙膜等介质上,可用来检测特定基因的表达,其原理主要是数百个甚至数千个探针与靶基因相互作用后的互补杂交。基因芯片技术具有准确、快速、灵敏度高等优点,可用于研究基因表达与疾病的关系、基因突变、基因多态性和基因测序等方面。目前大多数学者认为APA术后持续性高血压的发生是由多因素共同作用形成的,许多研究者在总结了APA术后持续性高血压患者临床特征后发现,女性、使用较少的降压药物和短的高血压病程和术后高血压治愈有关。而目前国内、外有关APA术后持续性高血压发病的遗传机制研究较少,大多数研究主要是研究APA发病机制有关的差异表达基因筛选、基因突变检测和基因多态性分析研究上。以往研究在比较了APA腺瘤组织与正常肾上腺后发现,CYP11B2、CAMK-Ⅰ、CYP11B1与APA发病或术后持续性高血压的发病相关。而对APA术后持续性高血压发生的遗传机制研究较少,如今还没有专门比较APA行单侧肾上腺切除术后持续性高血压患者和术后血压正常者之间腺瘤组织内表达差异基因方面的研究。目的：1、探讨APA患者单侧肾上腺切除术后持续性高血压患者的临床特点。2、在全基因组范围内筛选APA行单侧肾上腺切除术后,持续性高血压患者和术后血压正常者腺瘤组织内差异表达的基因,建立差异表达基因谱,为探讨APA术后持续性高血压发病的遗传学机制提供理论依据。3、在基因芯片筛选出的差异表达基因基础上,对在醛固酮瘤术后持续性高血压患者差异表达的基因,用qRT-PCR及免疫组织化学的方法进行检测,进一步验证差异表达的基因和基因芯片结果的可靠性。方法：1、回顾性分析了94例行单侧肾上腺切除术APA患者临床特征,按术后血压恢复情况分为2组：术后血压正常组(51例)和术后持续性高血压组(43例)分析手术前、后患者的临床资料特征：包括术前高血压家族史、高血压病程、降压药使用种类、人体测量学指标及生化指标等。2、采用高通量的基因芯片Human Transcriptome Array 2.0,对9例APA术后持续性高血压患者和12例术后血压正常者进行差异表达基因筛选,并对差异表达的基因进行GO富集分析、Pathway富集分析和nRNA-ncRNA共表达网络构建。3、与术后血压正常组相比,采用qRT-PCR方法,选取由基因芯片筛选出的9个差异表达的基因在40例APA患者中进行RNA水平的检测;同时采用免疫组织化学的方法,选择4个差异表达的基因在12例APA患者中进行蛋白水平的检测。结果：1、与APA患者术后血压正常组相比,两组在手术时的年龄、性别比、高血压家族史、术前血压水平、术前血醛固酮、肾素活性、ARR值、血肌酐、24h尿醛固酮和24h尿钾、甘油三酯、总胆固醇水平无显著差异;BMI、高血压病程、术前使用≥2种降压药物和低密度脂蛋白水平与术后持续性高血压发生有关(P0.05)。矫正了BMI和高血压病程后Logistic回归分析显示：术前使用≥2种降压药物(OR：2.758,P0.05)和低密度脂蛋白水平(OR：2.206,P0.05)是术后持续性高血压发生的独立危险因素。2、与APA术后血压正常组相比,在术后持续性高血压患者中共发现了99条差异表达的基因,其中48个mRNA和51个ncRNA。GO富集分析表明：差异表达基因的功能与细胞分化、脂质代谢过程、胞外区、细胞膜、金属离子结合和跨膜受体活性有关。Pathway分析发现：甘油磷脂的代谢途径、类固醇的生物合成途径、乙醚脂代谢、亚油酸代谢和a-亚麻酸代谢途径在持续性高血压患者中出现了富集：mRNA-ncRNA共表达网络图包括了48个节点和72个连接。3、QRT-PCR验证结果显示：COLEC12、FABP4、CST2、FAT1 和 MGP 基因在术后持续性高血压组内的RNA水平表达具有显著性差异；免疫组织化学结果显示：COLEC12、FABP4、FAT1 和 MGP在两组间表达同样具有显著性差异,与基因芯片结果一致。结论：1、本研究中APA患者行单侧肾上腺切除术后,高血压的恢复率为54.3%,术后持续性高血压的发生与BMI、高血压病程、术前使用≥2种降压药物和低密度脂蛋白水平相关,术前使用≥2种降压药物和高水平低密度脂蛋白是术后持续性高血压发生的独立危险因素。2、与APA术后血压正常者相比,在术后持续性高血压患者腺瘤组织中存在着差异表达的基因谱,提示差异表达的基因可能与APA术后持续性高血压的发生有关,这为下步进行差异表达基因的功能研究打下了基础。3、QRT-PCR和免疫组织化学方法进一步验证了差异表达的基因,提示COLEC12、FABP4、FAT1 和 MGP可能与APA术后持续性高血压的发生有关。
[Abstract]:Background : One of the main causes of persistent hypertension after APA has been studied in the following aspects : idiopathic hyperaldosterinemia ( IHA ) and aldosterone - producing adenoma ( APA ) . Methods : To investigate the clinical characteristics of patients with persistent hypertension after unilateral alectomy in APA patients . There were 99 differentially expressed genes ( OR : 2.758 , P0.05 ) and low density lipoprotein ( OR : 2.206 , P0.05 ) before operation .
Conclusion : 1 . After unilateral alectomy in APA patients , the recovery rate of hypertension is 54.3 % , the occurrence of persistent hypertension after operation is related to BMI and hypertension . It is suggested that the gene of differential expression may be related to the occurrence of persistent hypertension after operation . The gene of differential expression is further verified by QRT - PCR and immunohistochemistry . It is suggested that COLEC12 , FP4 , FAT1 and MGP may be related to the occurrence of persistent hypertension after APA .

【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R544.1;R586.2

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