VEGF-C联合HGF促进间充质干细胞向淋巴管内皮细胞分化的研究

发布时间：2018-09-13 09:48

【摘要】：目的：使用血管内皮细胞生长因子C(Vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)与肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor, HGF)联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)向淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)方向分化,寻求最适HGF浓度,探索HGF的促分化机制。方法：成功获得原代培养的第三代BMSCs,用流式细胞仪技术检测间充质干细胞的特异性表面抗原,并且将BMSCs向成骨方向诱导分化鉴定它的干细胞特性,最后取原代培养的第三代细胞进行诱导实验。设置50ng/mlVEGF-C分别联合10,20,40,60,80, 100ng/ml HGF配置诱导培养基的6个联合诱导组以及同时设置50ng/ml VEGF-C诱导组、50ng/ml HGF诱导组和空白对照组,诱导10d后利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitive PCR, RT-qPCR)检测各组LECs标志性分子淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(Lymphatic endothelial hyaluronan receptor 1, LYVE-1),同源异形盒蛋白1(Prospero homeobox prot ein 1, Prox1)的表达,得出HGF最适浓度。Western、RT-qPCR检测HGF诱导组、空白对照组、VEGF-C诱导组的LECs标志性分子LYVE-1、Prox1的表达,以及检测空白对照组、VEGF-C诱导组、HGF联合VEGF-C诱导组的整合素α9受体(integrin alpha9 receptor,integrin α 9)的表达。结果：成功得到离体的原代培养大鼠BMSCs,80ng/ml HGF联合50ng/ml VEGF-C诱导组的LYVE-1、Prox1的mRNA表达量最高(PProxl=0.000,PLYVE-1=0.000)同时,HGF诱导组不能探测到特异性LECs标志性分子的表达,HGF联合VEGF-C诱导组的integrin α 9的表达较VEGF-C诱导组明显提(Pwestern=0.001, PRT-qPCR=0.000)。结论：当HGF浓度为80ng/ml时,此时HGF联合VEGF-C可更好的促进大鼠BMSCs向LECs分化。同时,在该浓度条件下HGF不具有单独诱导大鼠BMSCs分化为LECs的能力,但能在诱导分化过程中明显提高integrin α9的表达,证明在促分化过程中HGF可能是通过间接上调integrin α9表达发挥作用。
[Abstract]:Aim: to induce the differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells (bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs) into lymphatic endothelial cells (lymphatic endothelial cells,LECs) by using vascular endothelial growth factor (C (Vascular endothelial growth factor) VEGF-C and hepatocyte growth factor (Hepatocyte growth factor, HGF) to seek the optimal concentration of HGF. To explore the mechanism of promoting differentiation of HGF. Methods: the third generation of primary cultured BMSCs, was successfully obtained to detect the specific surface antigen of mesenchymal stem cells by flow cytometry, and the BMSCs was induced to differentiate into osteoblasts to identify its stem cell characteristics. Finally, the third generation of primary cultured cells were used for induction experiment. Six co-induction groups with 100ng/ml HGF medium, 50 ng / ml HGF induction group with 50ng/ml VEGF-C induction group and a blank control group were set up, respectively. After 10 days of induction, the expression of hyaluronic acid receptor 1 (Lymphatic endothelial hyaluronan receptor 1 (LYVE-1) and homologous cassette protein 1 (Prospero homeobox prot ein 1 (Prox1) were detected by real time fluorescence quantitative PCR (Real-time quantitive PCR, RT-qPCR). The results showed that the optimal concentration of HGF. Western RT qPCR was used to detect the expression of hyaluronic acid receptor 1 (Lymphatic endothelial hyaluronan receptor 1 (LYVE-1) and homologous cassette protein 1 (Prospero homeobox prot ein 1 (Prox1). The expression of LECs marker LYVE-1,Prox1 in VEGF-C induced group and the expression of integrin 伪 9 receptor (integrin alpha9 receptor,integrin 伪 9) in VEGF-C induced group and VEGF-C group were detected. Results: the expression of LYVE-1,Prox1 mRNA was the highest (PProxl=0.000,PLYVE-1=0.000) in the primary cultured rat BMSCs,80ng/ml HGF combined with 50ng/ml VEGF-C induction group, and the expression of specific LECs iconic molecules could not be detected in the HGF-induced group and integrin 伪 9 in the VEGF-C induced group. The expression of Pwestern=0.001, PRT-qPCR=0.000 was significantly higher than that of VEGF-C induced group. Conclusion: when the concentration of HGF is 80ng/ml, HGF combined with VEGF-C can promote the differentiation of BMSCs into LECs. At the same time, HGF could not induce rat BMSCs to differentiate into LECs alone, but could obviously increase the expression of integrin 伪 9 in the process of inducing differentiation. It was suggested that HGF might play a role by indirectly up-regulating the expression of integrin 伪 9 in the process of promoting differentiation.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R551.2

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