替格瑞洛和阿司匹林基于UGT酶的药物相互作用研究

发布时间：2018-10-14 15:04

【摘要】：目的:观察双联抗血小板疗法(double antiplatelet therapy,DAPT)治疗过程中的血小板聚集率,采用重组尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UDP-glucuronosyltransferase,UGT)亚型体外研究替格瑞洛对UGT酶的抑制情况,推测替格瑞洛与阿司匹林潜在的药物相互作用,对替格瑞洛出血发生率增加的原因进行初步探索。方法:1.选取2015年6月-2016年2月在天津市人民医院心血管内科行冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI),术后规律服用双联抗血小板药物治疗的患者55例,根据服用P2Y12受体抑制剂的不同分为替格瑞洛组和氯吡格雷组,比较两组患者的光比浊(light transmission aggregometry,LTA)法检测的血小板聚集率。2.选择参与药物代谢的常见UGT酶亚型,即UGT1A1、UGT1A3、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15和UGT2B17,以4-甲基伞形酮(4-methyl umbeliferone,4-MU)为非特异性底物,体外建立葡萄糖醛酸结合反应的孵育体系,替格瑞洛作为抑制剂加入到孵育体系中共同孵育。以7-OH香豆素为内标,采用超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)检测4-MU的葡萄糖醛酸结合产物4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸(4-methylumbelliferone-β-D-glucuronide,4-MUG)。首先,进行抑制程度的初步测定,按照以前的研究选择酶浓度、底物浓度及反应时间,测定有抑制剂和无抑制剂时的4-MUG生成量,并计算残余率及抑制率。然后,选取多个浓度的抑制剂进行反应,观察替格瑞洛对UGT酶的抑制程度与替格瑞洛浓度的关系,计算半抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)值。根据IC50值选取四个抑制剂浓度及空白对照,并选取四个4-MU浓度进行反应,通过双倒数作图法,获得抑制类型,采用双倒数作图的斜率对替格瑞洛浓度进行第二次作图,计算出抑制动力学参数(inhibition kinetic parameters,Ki)。根据替格瑞洛体内浓度[I]与Ki的比值推测在体内替格瑞洛抑制UGT酶及发生药物相互作用的可能性。最后,通过计算机软件进行分子对接,解释替格瑞洛抑制UGT酶的机制。结果:1.替格瑞洛组的花生四烯酸(arachidonic acid,AA)诱导血小板聚集率及二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导的血小板聚集率均比氯吡格雷组低(均P0.05)。2.100μM的替格瑞洛对UGT1A1、UGT1A3、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15和UGT2B17的抑制率分别为74.98%、84.01%、100%、84.66%、100%、98.03%、93.58%、100%、100%、99.99%、99.32%。3.替格瑞洛对UGT1A1、UGT1A3、UGT1A6、UGT1A7、UGT1A8、UGT1A9、UGT1A10、UGT2B4、UGT2B7、UGT2B15及UGT2B17的IC50值分别为:0.043、8.256、12.86、2.472、39.34、0.2994、6.942、36.55、2.118、12.30及34.40μM。4.替格瑞洛对UGT1A1、1A3、1A9为竞争性抑制,对UGT1A6、1A7、1A10、2B4、2B7、2B15为非竞争性抑制。5.替格瑞洛对UGT1A1、1A3、1A6、1A7、1A9、1A10、2B4、2B7、2B15的Ki值分别为:2.05、4.05、1.59、40.32、0.0208、8.63、8.08、2.05及4.80μM。6.根据服用180mg替格瑞洛时,体内最高血药浓度为2.34μM,计算UGT1A1、1A3、1A6、1A7、1A9、1A10、2B4、2B7、2B15的[I]/Ki分别为:1.14、0.58、1.47、0.058、112.5、0.27、0.29、1.14、0.48。[I]/Ki0.1的为UGT1A7,意义为低度可能性抑制;0.1[I]/Ki1的为UGT1A3、1A10、2B4、2B15,意义为中度可能性抑制;[I]/Ki1的为UGT1A1、1A6、1A9、2B7,意义为高度可能性抑制。7.分子对接显示4-MU及替格瑞洛与UGT1A1的结合自由能分别为-5.68及-9.45 kcal/mol,4-MU及替格瑞洛与UGT1A3的结合自由能分别为-5.65及-8.63kcal/mol,4-MU及替格瑞洛与UGT1A6的结合自由能分别为-5.92及-7.41kcal/mol,4-MU及替格瑞洛与UGT1A7的结合自由能分别为-6.04及-8.36kcal/mol,4-MU及替格瑞洛与UGT1A9的结合自由能分别为-6.40及-7.54kcal/mol。结论:1.与氯吡格雷联合阿司匹林相比,替格瑞洛联合阿司匹林的AA和ADP诱导血小板聚集率均较低。2.替格瑞洛可以抑制UGT1A1、1A3、1A6、1A7、1A8、1A9、1A10、2B4、2B7、2B15及2B17的活性,对UGT1A1、1A3、1A9为竞争性抑制,对UGT1A6、1A7、1A10、2B4、2B7、2B15为非竞争性抑制。3.替格瑞洛在体内对UGT1A1、1A6、1A9、2B7为高度可能性抑制,对UGT1A3、1A10、2B4、2B15为中度可能性抑制,对UGT1A7为低度可能性抑制。4.替格瑞洛对UGT酶活性的抑制,推测替格瑞洛可能会抑制阿司匹林代谢产物水杨酸的代谢。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R541.4

【参考文献】