自噬在高糖高脂对H9c2心肌细胞凋亡中的影响

发布时间：2018-11-01 14:19

【摘要】：目的:自噬在糖尿病心肌病损伤中的作用至今不详。本实验采用高糖高脂诱导H9c2心肌细胞,建立糖尿病心肌病心肌肥大模型,观察高糖高脂对细胞损伤包括细胞凋亡的影响;探究自噬在高糖高脂诱导心肌细胞肥大中对H9c2心肌细胞凋亡的影响。方法:实验分三部分:(1)采用随机数表法将体外培养的H9c2心肌细胞随机分组:对照组、不同浓度高糖高脂(250μM、500μM、1 000μM)分别干预H9c2心肌细胞不同时间组(12 h、24 h、36 h、48 h),进行HE染色,通过测量心肌细胞表面积的方法观察高糖高脂对H9c2心肌细胞肥大的影响;RT-PCR法检测心肌肥大标记基因ANP和α-SKA表达水平;(2)采用随机数表法将H9c2心肌细胞进行分组(同第一部分),运用乳酸脱氢酶(LDH)活性检测方法评估细胞损伤程度;运用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测细胞活性和凋亡率;(3)结合以上实验结果,采用随机数表法将体外培养的H9c2心肌细胞随机分组:对照组、500μM高糖高脂干预H9c2心肌细胞36 h组(HGHL组)、自噬抑制剂氯喹预处理高糖高脂干预组(CQ+HGHL组),应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测自噬标志蛋白LC3 Ⅱ和细胞凋亡标志蛋白cleaved csapase-3表达水平,观察自噬在糖尿病心肌病心肌细胞肥大中对细胞凋亡的影响;应用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测对照组以及高糖高脂干预组(500μM组)自噬指标LC3 Ⅱ以及自噬信号通路p62/SQSTM1(p62)、Beclin-1、溶酶体相关膜蛋白LAMP1、LAMP2蛋白表达水平,探究自噬流在高糖高脂对心肌细胞凋亡中的影响。结果:1.高糖高脂处理可显著诱导H9c2心肌细胞肥大,呈浓度和时间依赖性。与对照组相比,HGHL(500μM)处理36 h时细胞表面积显著增加(P0.05),同时心肌肥大标记基因ANP、α-SKA表达显著增加(P0.01)。2.高糖高脂处理可损伤心肌细胞,导致细胞损伤程度、细胞凋亡率均明显增加,呈浓度和时间依赖性,HGHL(500μM)干预36 h时细胞凋亡率约50%(P0.05)。3.自噬流在高糖高脂诱导心肌细胞凋亡中发挥重要作用,与对照组相比,高糖高脂干预组(HGHL组)cleaved csapase-3蛋白表达水平增加(P0.05),而使用自噬抑制剂氯喹预处理心肌细胞1 h后,与对照组及高糖高脂组(HGHL组)相比,氯喹预处理组(CQ+HGHL组)细胞凋亡率显著增加(P0.05);自噬流水平在高糖高脂干预下发生显著变化,与对照组相比,高糖高脂干预组(500μM组)LC3 Ⅱ蛋白表达显著增加(P0.01),Beclin-1、LAMP1、LAMP2蛋白表达显著下降(P0.05),而p62蛋白水平显著升高(P0.01)。结论:1.高糖高脂诱导H9c2心肌细胞肥大具有一定时间及浓度依赖性,提示高糖高脂在诱导糖尿病性心肌病心肌损伤及发病和疾病进展过程中扮演不容忽视的角色;2.高糖高脂通过诱导H9c2心肌细胞凋亡进而促进心肌细胞损伤,提示高糖高脂对心肌损伤的影响与心肌凋亡有关;3.高糖高脂通过抑制H9c2心肌细胞自噬流,进而导致心肌细胞自噬体异常堆积,促进心肌细胞凋亡,提示在糖尿病心肌病发病过程中凋亡与自噬流障碍导致的自噬体异常堆积相关。
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【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R542.2

【参考文献】