血管紧张素转换酶（angiotensin I-converting enzyme,ACE）的制备及皱纹盘鲍ACE抑制肽的

发布时间：2018-11-12 14:06

【摘要】：高血压是一种常见的慢性病,其病理较为复杂。研究发现,血管紧张素转换酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE,EC 3.4.15.1)及氨肽酶对血压调节有重要作用。ACE是一种膜结合的羧基外肽酶,主要存在于哺乳动物的肺部,作用为将血管紧张素I(AngI)转换为血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ),并将缓激肽降解为无活性的片段,从而引起血管收缩,导致血压升高。而氨肽酶B(aminopeptidase B,APB,EC 3.4.11.6)可调控AngⅡI与AngIV之间的转化及缓激肽的生成,是降低血压的关键酶。APB与ACE共同维持着动物血压的稳定,因此,对这两种酶的性质研究有望为高血压的食源性防控提供重要参考。本研究利用氯化钠盐析及柱层析结合的方法,从猪肺中制备了ACE并实现了其分离纯化。结果显示,低成本制备的工具酶ACE效用良好,在冻藏条件下酶活力稳定,能维持一年以上。纯化的ACE的分子质量约为180 ku,双向电泳显示其pI约为5.7。肽质量指纹图谱鉴定得到二级质谱肽段17个,共293个氨基酸残基,与野猪ACE序列一致性为100%。酶学性质分析发现ACE不耐热,最佳反应温度为40°C,最适pH为8。同时,从猪肉中纯化得到APB,分子质量约为100 ku;肽质量指纹图谱鉴定获得17个肽段共计243个氨基酸残基,与猪的嘌呤敏感性氨肽酶的序列相似性为100%。酶学性质分析表明,APB最易从N端分解碱性氨基酸残基,动力学研究获得其Km和kcat值分别为1.5μmol/L和47.9s-1,kcat/Km为31.9 L/(μmol·s)-1。ACE及APB的制备与纯化以及性质研究为降血压活性物质的筛选奠定了重要基础。在此基础上,以鲍鱼为原料,采用复合蛋白酶酶解鲍鱼肌肉,经一步酶解制备了鲍鱼多肽,以制备的ACE为工具酶,测定其对ACE的抑制率为72%。响应面法优化得到其制备最佳工艺参数为反应pH 7.0,反应温度50°C,加酶量0.3%,酶解时间1.7 h。超滤后得到的分子量3 ku的鲍鱼多肽,具有良好的热稳定性及pH稳定性,且耐肠胃消化。通过2个不同剂量(100、200 mg/kg body weight)的鲍鱼多肽短期灌胃给药于自发性高血压大鼠,高剂量组效果可持续至8 h,血压值下降了42.56±3.20 mmHg并伴随着血浆中胰岛素调控氨肽酶(insulin-regulated aminopeptidase,IRAP,EC 3.4.11.3)活性的显著升高及APB、氨肽酶N(aminopeptidase N,APN,EC 3.4.11.2)活性的小幅度降低。而后利用Sephadex-G15凝胶过滤与反相高效液相色谱ZORBAX-C18柱对鲍鱼多肽作进一步纯化,获得了耐消化IC50值为70.5μg/mL的抑制肽IACG。具有良好降压效果的鲍鱼ACE抑制肽的分离及效用探究,不仅丰富了皱纹盘鲍的营养保健基础研究,且可帮助阐明ACE抑制肽的降压机理。
[Abstract]:Hypertension is a common chronic disease, its pathology is more complicated. It has been found that angiotensin converting enzyme (angiotensin I-converting enzyme,ACE,EC 3.4.15.1) and aminopeptidase play an important role in regulating blood pressure. ACE is a membrane-bound carboxyl exopeptidase, which mainly exists in mammalian lungs. Angiotensin I (AngI) was converted into angiotensin 鈪，

本文编号：2327330