氧化苦参碱对过氧化氢诱导的骨髓源间充质干细胞凋亡的相关研究

发布时间：2018-12-13 10:45

【摘要】：背景:急性心肌梗死(Acute mycardial infarction,AMI)是临床急危重症,尽管诊疗技术不断发展,使得AMI的病死率有所降低,然而梗死心肌细胞无法再生,随着后期心室重后,心肌梗死患者5年内死亡率仍高达百分之五十。目前干细胞移植治疗成为再生修复梗死心肌的新策略,其中骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)因其具有自我更新及有多向分化潜能,可在一定条件下被诱导分化为成多种成体细胞类型,成为再生修复心肌细胞的种子细胞之一。然而移植的BMSCs在梗死区域中存活率低,不能达到理想的治疗效果。因此,如何提高干细胞在梗死区的存活率,是BMSCs移植治疗成功的重要因素。氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)又名苦参素,提炼于苦参或平科植物广豆根中的生物碱,具有抗病毒、抗炎、降压等作用,研究发现,OMT可通过PI3K/AKT信号通路调控细胞存活,并可调节Nrf2核转录上调H0-1的表达,调节凋亡蛋白从而达到抗细胞凋亡的作用,但是氧化苦参碱对氧化应激状态下的BMSCs是否具有保护作用,PI3K/AKT信号通路的是否参与其中?目前均不清楚。目的1.明确氧化苦参碱对氧化应激状态下的BMSCs是否具有保护作用;2.探讨氧化苦参碱对BMSCs的作用是否通过PI3K/AKT信号通路调节Nrf2核转录及H0-1介导。方法:1.BMSCs的培养、传代及鉴定:采用BMSCs贴壁法培养SD大鼠的BMSCs,通过流式细胞术鉴定其纯度,取第3代BMSCs进行随后实验;2.以不同浓度的H_2O_2(200,100,50,25,0μM)处理BMSCs2h,,行CCK8确定诱导BMSCs凋亡的合理浓度;3.氧化苦参碱作用浓度摸索:以不同浓度的氧化苦参碱(0.1mg/ml-0.07mg/ml)分为0.1、0.09、0.08、0.07预处理BMSCs24h后再分别加入H_2O_2(100μM)处理2h行CCK-8法检测细胞活力,只加完全培养基空白组作对照,正常组即不予H_2O_2处理,确定OMT保护BMSCs活力的最佳浓度;4.实验分为三组:空白组:细胞不予任何处理;H_2O_2组:只加入H_2O_2(100um)5.处理2h;OMT+H_2O_2组:予OMT(0.1mg/ml)预处理BMSCs24h再加入H_2O_2(100um)处理2h后行流式细胞术检测各组BMSCs的凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3、Bax和bcl-2的表达;6.实验分为四组:空白组:细胞不予任何处理;H_2O_2组:只加入H_2O_2(100um)处理2h;OMT+H_2O_2组:予OMT(0.1mg/ml)预处理BMSCs24h再加入H_2O_2(100um)处理2h后OMT+H_2O_2+LY294002组:予LY294002预处理BMSCs 1h后加入OMT(0.1mg/ml)处理24h,最后加入H_2O_2(100um)处理2h;行流式检测各组细胞凋亡;行Western blot检测各组凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax及Bcl-2的表达;7.分组同5,行Western blot检测AKT、P-AKT的磷酸化以及比较OMT对Nrf2在细胞核内、外表达的情况以及HO-1的表达;结果:1.BMSCs的培养、传代及鉴定:原代BMSCs培养48h后,镜下观察细胞呈圆形亮点状,4-5天时观察BMSCs完全变为梭形,7-8天时镜下可见细胞大量增殖铺满整个瓶底。原代BMSCs细胞传代培养到第2-3代后呈均匀分布的长梭形或鱼群样细胞。流式细胞术检测BMSCs表面标记显示:CD29 98.5%CD90 98.7%2.CCK8结果显示:H_2O_2可使BMSCs活力显著降低,100μMol/LH_2O_2为诱导BMSCs凋亡的合理浓度(P0.01);3.CCK8显示H_2O_2可使BMSCs活力显著降低,而随着OMT处理浓度从小到大梯度的变化,其细胞活力也呈梯度增大变化,当OMT作用浓度达0.1mg/ml时细胞活力达最大值(P0.01);4.流式细胞术结果:与H_2O_2组相比,OMT预处理可明显减少由H_2O_2介导的BMSCs凋亡,(P0.01);Western blot检测显示OMT组促凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3及Bax的表达减少,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达增高(P0.01);5.流式细胞术显示OMT+H_2O_2+LY294002的BMSCs凋亡率和死亡率显著升高,同时Western blot检测Caspase-3和Bax蛋白表达显著增加,而Bcl-2则显著降低,与OMT+H_2O_2组相比(P0.01);Western blot检测显示与空白组相比,OMT预处理可使磷酸化p-AKT蛋白表达升高(P0.01);但应用阻断剂后磷酸化蛋白水平p-AKT较OMT组显著降低(P0.01),与对照组相比无差异(P0.05);6.Western blot检测检测显示OMT组Nrf2在细胞核的表达显著增加,与H_2O_2组相比(P0.01),而细胞浆内,与细胞核完全相反;OMT组HO-1表达显著增加,与H_2O_2组相比(P0.01)。结论:1.OMT对H_2O_2诱导的BMSCs具有抗凋亡作用,该作用是通过抑制促凋亡蛋白Caspase-3和Bax表达和上调抗凋亡蛋白Bcl-2水平而实现的2.在BMSCs中OMT可能通过激活PI3K/AKT信号通路,启动Nrf2抗氧化元件,促进H0-1的表达,进而发挥OMT抗氧化应激损伤保护作用;
[Abstract]:......
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R54

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 陈睿;顾雪中;吴芳;;反相高效液相色谱同时测定苦参栓中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J];上海中医药杂志;2007年07期

2 陈凌;骆凯;吴峗;闫福华;;氧化苦参碱抗炎作用研究新进展[J];医学综述;2007年15期

3 潘广洲;李峰;李键;;苦参碱和氧化苦参碱的转化对苦参提取工艺的影响[J];现代中药研究与实践;2008年02期

4 顾宏霞;刘婧;何黎琴;王效山;;氧化苦参碱的合成[J];化学世界;2009年05期

5 臧晋;李杰;李慧星;;氧化苦参碱提取工艺的研究[J];云南中医中药杂志;2009年06期

6 臧晋;;氧化苦参碱提取条件的优化[J];南阳理工学院学报;2009年01期

7 周玲;;苦参碱及氧化苦参碱生物活性研究进展[J];农业与技术;2009年06期

8 杨金香;贺艳斌;李俊波;白熙;;基于共振瑞利散射光谱法对氧化苦参碱的测定研究[J];山西师范大学学报(自然科学版);2011年03期

9 陈晓峡;向小庆;叶红;;苦参碱及氧化苦参碱抗肿瘤作用的研究进展[J];中国实验方剂学杂志;2013年11期

10 谢明智,周文正,张瑛;氧化苦参碱的代谢[J];药学学报;1981年07期

相关会议论文 前10条

1 陈咏梅;郑秋莹;吕家森;周微;;毛细管气相色谱法测定氧化苦参碱中残留溶剂[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

2 郭治彬;付金国;赵勇;刘睦胜;马延峰;;氧化苦参碱的心血管药理作用研究进展[A];江西省第三次中西医结合心血管学术交流会论文集[C];2006年

3 吴晓鸾;杭太俊;张正行;沈建平;张银娣;;氧化苦参碱及其代谢物在健康人体内的药代动力学[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年

4 杨俊;刘继红;樊龙昌;王涛;何俊文;张滋洋;;氧化苦参碱干预阴茎海绵体纤维化疾病的实验研究[A];中华医学会第八次全国男科学学术会议论文集[C];2007年

5 杨俊;刘继红;樊龙昌;王涛;何俊文;张滋洋;;氧化苦参碱干预阴茎海绵体纤维化疾病的实验研究[A];湘鄂赣首届性与生殖健康学术研讨会论文汇编[C];2007年

6 戴贵东;;氧化苦参碱和苦参碱调控一氧化氮信号转导通路作用的研究[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年

7 侯伟;刘海燕;周戬平;李丹;杨智毅;;氧化苦参碱对小鼠哮喘模型气道树突细胞及细胞因子表达变化影响的研究[A];西北五省（区）第六届儿科学术交流大会论文汇编[C];2008年

8 周军辉;王答祺;李思锋;;4种豆科植物种子中氧化苦参碱的含量分析和其它3种生物碱的定性分析比较[A];中国植物园（第十四期）[C];2011年

9 梁冰;李淑芳;王骁宇;刘锦红;沈祥春;;氧化苦参碱对环磷酰胺的增效减毒作用研究[A];低碳生活与健康损害论坛——中国环境诱变剂学会风险评价专业委员会全国第十三届学术会议暨第四届第5次委员会会议论文集[C];2011年

10 黄美蓉;;氧化苦参碱对抗原致敏支气管哮喘大鼠气道高反应性的影响[A];湖北省暨武汉市病理生理学会第十四届学术年会论文汇编[C];2008年

相关重要报纸文章 前10条

1 程书权;氧化苦参碱现代研究与应用进展[N];中国中医药报;2004年

2 常山;氧化苦参碱对慢性乙肝疗效好[N];中国中医药报;2001年

3 严志明;氧化苦参碱治乙肝效果明显[N];健康报;2002年

4 常山;苦参治乙肝有良效[N];上海中医药报;2002年

5 程书权;中药及其活性成分治疗肝病的现代研究[N];中国中医药报;2004年

6 张旦昕 陈青;氧化苦参碱等药物可使肝纤维化逆转[N];医药导报;2004年

7 小周;氧化苦参碱杀虫剂将生产[N];经济消息报;2000年

8 徐铮奎;丙肝药市场三军把阵[N];医药经济报;2007年

9 记者 张艳蕊 通讯员 阎振杰;我国中药现代化迈出突破性步伐[N];中国企业报;2001年

10 ;化工实用专利信息[N];中国化工报;2005年

相关博士学位论文 前7条

1 杜松;氧化苦参碱脂质体的研究[D];沈阳药科大学;2005年

2 牛雯;氧化苦参碱对低氧性肺动脉高压的防治作用及其机制研究[D];第四军医大学;2014年

3 刘晓红;氧化苦参碱生物药剂学与药物动力学基础研究[D];沈阳药科大学;2007年

4 樊龙昌;氧化苦参碱干预大鼠阴茎海绵体纤维化作用机制的实验研究[D];华中科技大学;2007年

5 郑红;中药生物碱类化合物在大鼠体内经皮药代动力学及代谢的研究[D];第二军医大学;2007年

6 杨建宏;RGD修饰的氧化苦参碱聚合物泡囊抗肝纤维化作用的研究[D];南方医科大学;2013年

7 王驰;天然药物氧化苦参碱、绿茶多酚对鼻咽癌HNE-1细胞耐药逆转研究[D];重庆医科大学;2004年

相关硕士学位论文 前10条

1 张苏明;氧化苦参碱对高糖致大鼠视网膜色素上皮细胞损伤的干预作用[D];河北医科大学;2015年

2 韩卓笑;氧化苦参碱对高糖诱导大鼠肾脏系膜细胞纤维化的影响[D];河北医科大学;2015年

3 沈雪;氧化苦参碱对砷致肝细胞损伤的保护作用及机制研究[D];贵阳医学院;2015年

4 周隆书;氧化苦参碱延迟预处理通过蛋白激酶C对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用[D];宁夏医科大学;2015年

5 王秋艳;氧化苦参碱抗类风湿性关节炎的作用及机制[D];宁夏医科大学;2015年

6 徐烨华;氧化苦参碱对慢性心力衰竭大鼠心肌COX-2/PGIS表达的影响[D];宁夏医科大学;2015年

7 吴琴;氧化苦参碱对2型糖尿病大鼠血管损伤的调控作用[D];南昌大学医学院;2015年

8 张岩;基于微透析取样技术的氧化苦参碱大鼠体内药代动力学研究[D];浙江工业大学;2015年

9 曾成;山豆根药材全国生产区划研究[D];广西师范大学;2015年

10 张超;苦荆软膏的初步药学研究[D];成都中医药大学;2015年

，

本文编号：2376412