雷米普利对慢性心力衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

发布时间：2019-02-24 14:02

【摘要】：在慢性心力衰竭的逐渐发展过程中,多伴有肾脏功能损害,肾脏功能损害又会加重心力衰竭的程度,并严重影响心衰患者的预后。因此预防心衰患者的肾脏损害对于心衰患者的治疗及预后都有重要的临床意义。目前,血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI)被广泛用于心脏病的治疗,但就ACEI用于延缓心衰大鼠的肾脏纤维化进程的研究却很少,因此本实验主要研究ACEI类药物雷米普利对肾脏纤维化的影响作用。相关研究显示,血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)通过多种方式出现异常表达介导肾间质纤维化的发生。转化生长因子-β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)的下游作用因子,即结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表达也被证实与肾小管间质纤维化呈正相关。因此选定PDGF-B和CTGF作为观察雷米普利对肾间质纤维化影响作用的实验指标。本实验拟应用雷米普利干预慢性心力衰竭大鼠,观察其对心衰大鼠肾脏病理改变的作用,及对细胞因子PDGF-B和CTGF表达的影响。目的:本实验通过腹主动脉部分缩窄法建立大鼠的心力衰竭模型。造模成功后,应用雷米普利对药物组大鼠进行4周的干预,分别采用HE染色法和Masson染色法对肾组织进行染色,在光镜下观察3组大鼠肾脏的病理结构改变,采用SP免疫组化法检测3组大鼠肾组织中CTGF和PDGF-B的蛋白表达水平,采用RT-PCR测定3组大鼠肾组织中CTGF m RNA和PDGF-B m RNA的水平。通过观察各组大鼠肾脏的病理改变及细胞因子PDGF-B和CTGF的表达情况来研究雷米普利对肾脏纤维化的抑制作用。方法:1采购40只雄性清洁级Wistar大鼠,喂养6天后,应用随机的方法选取10只大鼠作为假手术组(开腹后仅分离腹主动脉,不结扎);其余30只大鼠采用肾上腹主动脉缩窄法制作慢性心衰模型,术后喂养4周,应用随机的方法从30只大鼠中选取10只检测其血流动力学参数,规定将左室舒张末压(left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)≥15mm Hg作为成模标准;造模成功后随机选取10只作为模型组,随机选取10只作为雷米普利组。2当3组实验大鼠喂养到观察终点时,应用电生理记录仪检测大鼠心脏的血流动力学参数:LVEDP和左心室内压上升及下降的最大速率(left ventricular pressure maximum rate of rise and fall,±dp/dtmax),记录详细数据。3采用HE染色法和Masson染色法,在光镜下观察各组大鼠肾脏的病理结构改变。4采用SP免疫组织化学法测定各组大鼠肾组织中CTGF蛋白和PDGF-B蛋白的表达水平。5采用RT-PCR检测各组大鼠肾组织中CTGF m RNA和PDGF B m RNA的表达水平。结果:1各组大鼠血流动力学参数比较假手术组、模型组、药物组的LVEDP分别是:5.16±0.18mm Hg、19.39±0.35mm Hg、11.23±0.30mm Hg。与假手术组相比,模型组的LVEDP显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。药物组的LVEDP较假手术组明显升高,而较模型组的显著下降,差异均有统计学意义(P0.01)。假手术组、模型组、药物组的+dp/dtmax分别是:4346.62±174.29mm Hg/s、2556.17±91.69mm Hg/s、3248.91±55.08mm Hg/s。假手术组、模型组、药物组的-dp/dtmax分别是:5555.15±60.70mm Hg/s、4104.70±84.33mm Hg/s、4850.96±76.14mm Hg/s。药物组的左心室内压最大上升速率及下降速率均明显低于假手术组,而明显高于模型组,差异均有统计学意义(P0.01)。2各组大鼠肾脏组织形态学改变2.1 HE染色假手术组的大鼠肾脏结构清晰,组织形态正常,肾小球形态规则,肾小管管腔无扩张,上皮细胞排列整齐。模型组大鼠肾小管明显扩张,肾间质明显增宽,肾小管上皮细胞排列紊乱,染色变浅。药物组可见肾小管轻度扩张,肾小管上皮细胞排列不整齐,肾间质轻度增宽。2.2 Masson染色假手术组大鼠肾小管间质及肾小球内无明显蓝绿色染的胶原纤维;模型组大鼠的肾间质可见大面积蓝绿色染的胶原纤维沉积,肾小球内无胶原纤维沉积;药物组肾间质及肾小管上皮细胞内可见少量绿染的胶原纤维沉积,肾小球内无明显绿染的胶原纤维。对Masson染色进行胶原半定量分析结果发现,药物组大鼠测得的相对间质容积值(11.21±0.82%)高于假手术组(3.88±0.27%)且明显低于模型组(32.94±1.76%),任意两组间的差异均有统计学意义(P0.01)。3各组大鼠肾脏组织中PDGF-B和CTFG蛋白的表达情况3.1 CTGF免疫组化染色假手术组大鼠肾小管及肾间质细胞内可见极少量棕黄色染色,为弱阳性;模型组大鼠小管上皮细胞中可见大量CTGF阳性染色,为强阳性,间质区少量表达;药物组大鼠仅肾小管上皮细胞内可见黄染区,为阳性,但黄染程度比模型组大鼠弱,各组之间两两比较的差异均有统计学意义(P0.01)。3.2 PDGF-B免疫组化染色假手术组大鼠肾间质和肾小管上皮细胞胞质内可见少量棕黄色染色,为弱阳性;跟假手术组大鼠比较,模型组大鼠黄染程度明显增强;药物组大鼠肾组织的黄染程度重于假手术组,而弱于模型组,各组之间两两比较的差异均有统计学意义(P0.01)。4各组大鼠肾脏组织PDGF-B和CTFG m RNA的表达4.1 CTGF基因水平在假手术组大鼠的肾组织中可检测到CTGF m RNA呈现低表达状态,而模型组大鼠肾组织中CTGF m RNA的表达明显上调;药物组大鼠肾组织中CTGF m RNA的表达高于假手术组,而低于模型组;任意两组之间的表达均有统计学差异(P0.01)。4.2 PDGF-B基因水平对比假手术组大鼠,模型组、药物组大鼠的PDGF-B m RNA表达均有上调,以模型组上调程度更为明显,三者之间的表达均有统计学差异(P0.01)。结论:1慢性心力衰竭可以导致大鼠肾间质纤维化。2雷米普利可以延缓慢性心力衰竭所致的肾间质纤维化,作用机制可能与CTGF、PDGF-B的表达下调有关。
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【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R541.6

【参考文献】