miR-155在氧化低密度脂蛋白介导的脐静脉内皮细胞自噬中的作用

发布时间：2019-03-15 10:05

【摘要】：目的:探讨miR-155在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬中的作用。方法:1.采用浓度为100μg/m L的ox-LDL对HUVECs作用处理,分别在不同的时刻收集细胞,用电镜观察HUVECs内的超微改变,同时采用qRT-PCR技术检测LC3和p62的mRNA的表达及mi R-155的表达,用Western blot技术测定LC3-II及p62的蛋白水平,初步观察ox-LDL对HUVECs自噬水平及miR-155水平的改变。2.将HUVECs分为正常对照组,ox-LDL组,ox-LDL+miR-155mimic组,ox-LDL+miR-155inhibior组及ox-LDL+miRNA negative control(NC)组五个试验组。其中正常对照组不加任何干扰,而ox-LDL组,ox-LDL+miR-155mimic组,ox-LDL+miR-155inhibior组及ox-LDL+miRNA NC组则用ox-LDL(100μg/m L)进行诱导刺激。用电镜观察各组细胞内的自噬体的形状和数量,用qRT-PCR方法测定LC3和p62的mRNA的水平,用Western blot技术检测LC3-II及p62的蛋白表达水平。结果:1.我们用100μg/m L的ox-LDL处理HUVECs 6小时、12小时后,电镜结果显示细胞内出现较多的自噬体及自噬溶酶体,qRT-PCR技术显示LC3m RNA表达上调,而p62mRNA表达下调,western blot结果显示LC3-II/GAPDH的水平上升,而p62/GAPDH的水平下降。由于细胞内LC3上调及p62下调在6小时的时候最明显,因此,我们将6小时作为后续实验的作用时间点。此外,qRT-PCR结果显示ox-LDL处理后的细胞内miR-155的表达增加。2.用miR-155mimic,miR-155inhibior及miR-155 NC对细胞进行转染,并用100μg/mL ox-LDL处理细胞6小时后,我们发现,上调miR-155的表达后,细胞内自噬体及自噬溶酶体的数量明显增加,同时LC3的表达水平提高,p62的表达程度降低,而下调miR-155的水平后,细胞内自噬体的数目减少,LC3表达降低,p62的表达水平升高。结论:ox-LDL能够介导HUVECs自噬,并上调miR-155表达;miR-155能够调节ox-LDL诱导的HUVECs自噬。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R543.5

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 肖星;潘旭东;马爱军;吴梅;杨绍楠;王婷;孙清琳;杨淑娜;王兰;;微小RNA对内皮细胞炎性反应过程中血管内皮细胞黏附分子1表达的影响[J];中华老年心脑血管病杂志;2016年05期

2 周林林;郭乐;汤建中;张爱君;刘学英;徐广贤;;miR-144通过靶向Atg4a调控卡介苗和雷帕霉素诱导的RAW264.7细胞自噬[J];细胞与分子免疫学杂志;2015年02期

3 郝凤成;苏中华;;自噬在ox-LDL诱导炎症反应中的保护作用[J];山东大学学报(医学版);2014年04期

4 ;Neuronal autophagy in cerebral ischemia[J];Neuroscience Bulletin;2012年05期

，

本文编号：2440539