锌诱导心肌细胞线粒体自噬机制的研究

发布时间：2019-07-10 12:16

【摘要】：目的观察锌离子能否诱导H9c2心肌细胞线粒体自噬并探讨锌离子是否通过MUL1、ULK1诱导心肌细胞线粒体自噬。方法1.建立H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型。2.Western blotting法检测TOM20、TIM23、COXⅣ等线粒体标记蛋白的表达水平。3.实时荧光定量PCR法检测MUL1的基因表达水平。4.采用RNA干扰的方法特异性沉默MUL1基因的表达。5.采用荧光蛋白标记和免疫荧光技术检测线粒体和自噬体的共定位。6.采用RNA干扰的方法特异性沉默ULK1基因的表达。结果1.Western blotting结果显示,与H/R组相比,用1μM Zn Cl2和4μM锌载体处理H9c2心肌细胞30min(复氧前5 min至复氧后25 min),线粒体标记蛋白TOM20、TIM23、COXⅣ表达减少,提示锌能够诱导H9c2心肌细胞线粒体自噬。2.ZnCl2诱导的H9c2心肌细胞线粒体自噬被泛素化蛋白酶抑制剂MG132所抑制,说明锌对H9c2心肌细胞线粒体自噬的作用是通过泛素化蛋白酶系统实现的。3.转染MUL1 siRNA后,ZnCl2诱导的H9c2心肌细胞线粒体自噬明显减弱。说明锌诱导H9c2心肌细胞线粒体自噬可能与MUL1有关。4.免疫荧光实验结果显示,MUL1 siRNA使GFP-LC3绿色荧光减弱,TOM20红色荧光增强,进一步证实锌可能通过MUL1诱导H9c2心肌细胞线粒体自噬。5.转染ULK1 siRNA后,ZnCl2诱导的线粒体自噬明显减弱,说明锌通过ULK1途径诱导H9c2心肌细胞线粒体自噬。6.转染MUL1 siRNA后,ULK1蛋白表达明显增多,说明MUL1调控ULK1蛋白的稳定性。7.Zn Cl2使ULK1的蛋白表达水平明显减少,而这种作用可被泛素化蛋白酶抑制剂MG132抑制。这一结果说明,在锌诱导H9c2心肌细胞线粒体自噬的过程中,ULK1的蛋白表达水平受泛素蛋白酶系统的调控。结论1.锌离子诱导H9c2心肌细胞发生线粒体自噬,且有明显的时间依赖性,其中30 min作用时间最为明显。2.锌离子可能通过泛素化蛋白酶系统来实现线粒体自噬。3.锌离子通过MUL1调控ULK1的蛋白水平,进而诱导H9c2心肌细胞线粒体自噬。
文内图片：
图片说明：ZnCl2处理H9c2心肌细胞示意图
[Abstract]:Objective to observe whether zinc ion can induce mitochondrial autophagy in H9c2 cardiomyocytes and to explore whether zinc ion can induce mitochondrial autophagy in H9c2 cardiomyocytes through MUL1,ULK1. Method 1. The model of hypoxia / reoxidation (H 鈮，

本文编号：2512601