循环miRNA及miR-31对原发性高血压左室肥厚的影响

发布时间：2019-08-27 17:15

【摘要】：目的:探讨原发性高血压左室肥厚患者循环mi RNA的特异性表达变化,为高血压左室肥厚的诊断和预测寻找新的生物学标志。方法:入选原发性高血压合并左室肥厚及原发性高血压不合并左室肥厚患者各5例,采集患者血浆标本并进行mi RNA提取,通过高通量二代测序技术检测两组患者循环mi RNA表达变化,对测序数据进行分析筛选出差异性表达mi RNA,进一步通过生物信息学分析差异表达mi RNA的靶基因并进行功能富集分析,初步探讨差异表达mi RNA的功能。结果:筛选出原发性高血压左室肥厚患者差异化特异性表达mi RNA共64个,其中35个表达上调,29个表达下调;生物信息学分析显示差异性表达mi RNA的功能主要涉及心肌细胞肾上腺素信号、神经活化配体/受体相互作用、免疫炎症反应、脂肪酸代谢等与高血压左室肥厚密切相关信号通路的调控,其中hsa-mir-100、hsa-mir-202、hsa-mir-181a-2、hsa-mir-450b富集的功能最为显著。结论:原发性高血压左室肥厚患者外周循环中存在特异性mi RNA表达谱,可为原发性高血压左室肥厚的诊断和预测提供候选生物学标志。目的:观察心肌细胞肥大过程中mi R-31与LATS2的表达变化,为后续实验提供依据。方法:体外培养原代大鼠心肌细胞,给予10-6 mol/LAng II刺激构建体外心肌细胞肥大模型,q RT-PCR检测心肌肥大基因ANP、β-MHC表达,心肌细胞F肌动蛋白荧光探针染色观察心肌细胞形态的变化,以确认心肌细胞肥大模型。q RT-PCR检测心肌细胞肥大过程中mi R-31与LATS2的表达变化,Western blot进一步检测LATS2蛋白表达变化。结果:给予10-6 mol/LAngII刺激成功构建心肌细胞肥大模型,干预2天后即可检测到心肌细胞肥大基因ANP、β-MHC表达上调,干预4天后心肌细胞荧光染色显示心肌细胞表面积明显增大。伴随心肌细胞的肥大变化,mi R-31表达显著上调,而LATS2在基因及蛋白水平均明显下调。结论:给予Ang II刺激可成功构建心肌细胞肥大模型;伴随心肌细胞的肥大变化,mi R-31表达显著上调,而LATS2在基因及蛋白水平均明显下调。目的:通过下调肥大心肌细胞中mi R-31的表达,观察mi R-31对LATS2及心肌细胞肥大的调控作用方法:构建mi R-31抑制物慢病毒载体(LV-mi R-31-inhibitor),体外感染心肌细胞肥大模型,q RT-PCR检测肥大基因ANP、β-MHC表达,心肌细胞F肌动蛋白荧光探针染色观察心肌细胞形态的变化,监测心肌细胞肥大的演变。q RT-PCR检测心肌细胞肥大演变过程中LATS2的表达变化,Western blot进一步检测LATS2蛋白表达变化。结果:LV-mi R-31-inhibitor感染心肌细胞肥大模型可大幅下调mi R-31表达水平,并可促使心肌细胞肥大基因ANP、β-MHC表达下调,同时心肌细胞荧光染色显示细胞表面积明显减小;伴随心肌细胞肥大的演变,LATS2在基因水平略有上调但无显著差异,而蛋白水平表达却明显增加。结论:下调肥大心肌细胞mi R-31表达水平可一定程度逆转心肌细胞肥大,mi R-31可能通过作用于LATS2调控心肌细胞肥大的发生。目的:验证mi R-31对LATS2的直接靶向调控作用。方法:采用双萤光素酶质粒作为工具载体,分别插入LATS2-3'UTR野生型(LATS2-3'UTR)及突变型(LATS2-3'UTR-MU)基因片段,构建LATS2-3'UTR及LATS2-3'UTR-MU双萤光素酶基因报告载体。将荧光素酶报告质粒及双萤光素酶空载质粒(LATS2-3'UTR-NC)与mi R-3l过表达质粒及mi R-3l空载质粒两两分别转染293T细胞,检测各转染组荧光素酶活性以鉴定mi R-3l对LATS2的靶向作用。结果:与mi R-3l过表达质粒及LATS2-3'UTR-MU双萤光素酶基因报告质粒共转染组相比,mi R-3l过表达质粒及LATS2-3'UTR双萤光素酶基因报告质粒共转染组荧光素酶活性显著性降低。结论:mi R-3l可与LATS2的3'UTR结合实现其对LATS2靶向调控作用。
【图文】：

集分析（图 2.1、图 2.2、表 2.5、表 2.6）。对差异倍数最大的 10 个 miRNA（上调选择 5 个，，下调选择 5 个）进行 pathway 富集分析图构建，得到了 4 个 miRNA（hsa-mir-100、hsa-mir-202、hsa-mir-181a-2、hsa-mir-450b）的功能富集结果（图2.3）。

图 2.1 上调 miRNA 调控靶基因的功能富集分析结果图。左图代表生物学过程(BP),中途代表分子功能（MF），右图代表细胞组成（CC）。图中横坐标代表富集的基因个数，图例（颜色深浅）代表富集的显著性 p 值。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.11

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